印跡基因PEG3在正常早孕與胚胎停止發(fā)育的絨毛組織中表達(dá)的差異及機制研究.pdf

1、目的：
　　對哺乳動物而言，印記基因指的是只表達(dá)親本一方的遺傳信息，而另一方處于關(guān)閉狀態(tài)的一類基因?；蛴∮泴Σ溉閯游镏陵P(guān)重要，在其生長，發(fā)育以及細(xì)胞分化等過程中都發(fā)揮重要作用。大多數(shù)的印記基因都與胚胎發(fā)育密切相關(guān)，可以調(diào)節(jié)胚胎的生長，發(fā)育，甚至可以影響新生兒的生長。有報道指出印記功能的紊亂可以導(dǎo)致多種發(fā)育異常，有時也會造成死胎。雖然印記基因的意義重大，但是它的形成，特異性識別以及印記基因的表達(dá)缺陷等機制尚不清楚。人類的PEG3基

2、因位于19q13.4，已經(jīng)被證明是父系表達(dá)的基因。PEG3在卵巢，睪丸，胎盤中均有大量表達(dá)。
　　胚胎停止發(fā)育包括生理性胚胎發(fā)育暫時停止和病理性胚胎發(fā)育停止致胚胎死亡。胚胎停止發(fā)育的原因多數(shù)不是很明確。
　　本研究對正常早孕絨毛組織與胚胎停止發(fā)育絨毛組織中印記基因PEG3的表達(dá)進行了分析。進一步探討PEG3在孕早期對胚胎發(fā)育的作用及其機制。
　　方法：
　　一、PEG3在正常早孕絨毛組織與胚胎停止發(fā)育絨毛組織的表

3、達(dá)
　　1、Western Blot方法檢測PEG3蛋白在正常早孕與胚胎停止發(fā)育的絨毛組織（各45例）中的表達(dá)。
　　2、RT-PCR方法檢測PEG3的RNA水平在正常早孕與胚胎停止發(fā)育的絨毛組織（各45例）中的表達(dá)。
　　3、免疫組化方法檢測PEG3蛋白在正常早孕與胚胎停止發(fā)育的絨毛組織（各45例）中的表達(dá)。
　　二、過表達(dá)PEG3對HTR8-SVneo細(xì)胞增殖的影響
　　1、MTT技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染不同濃度的

4、PEG3對HTR8-SVneo細(xì)胞增殖的影響。
　　2、流式分析技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染不同濃度的PEG3對HTR8-SVneo細(xì)胞周期的影響。
　　2、Western Blot方法檢測轉(zhuǎn)染不同濃度的PEG3對p21和Cyclin D1蛋白的表達(dá)影響。
　　3、RT-PCR方法檢測轉(zhuǎn)染不同濃度的PEG3對p21和Cyclin D1的mRNA水平的影響。
　　三、過表達(dá)PEG3對HTR8-SVNEO細(xì)胞凋亡的影響
　　1

5、、ANNEXIN-Ⅴ-FITC試劑盒檢測轉(zhuǎn)染不同濃度的PEG3對HTR8-SVNEO細(xì)胞凋亡水平的影響。
　　2、Western Blot方法檢測轉(zhuǎn)染不同濃度的PEG3對Caspase3蛋白的表達(dá)影響。
　　3、RT-PCR方法檢測轉(zhuǎn)染不同濃度的PEG3對Caspase3的mRNA水平的影響。
　　結(jié)果：
　　一、PEG3在正常發(fā)育的絨毛中表達(dá)高于胚停發(fā)育的絨毛組織
　　1、PEG3的蛋白水平在正常發(fā)育的絨

6、毛中表達(dá)高于胚停發(fā)育的絨毛組織。
　　2、PEG3的mRNA水平在在正常發(fā)育的絨毛中表達(dá)高于胚停發(fā)育的絨毛組織。
　　二、過表達(dá)PEG3促進HTR8-SVNEO細(xì)胞的增殖
　　1、過表達(dá)PEG3可以促進HTR8-SVNEO細(xì)胞增殖。
　　1、過表達(dá)PEG3可以促進HTR8-SVNEO細(xì)胞G1到S期的轉(zhuǎn)化。
　　2、過表達(dá)PEG3可以增高Cyclin D1的蛋白水平及mRNA水平的表達(dá)同時降低p21蛋白水平及

7、mRNA水平的表達(dá)。
　　三、過表達(dá)PEG3抑制HTR8-SVNEO細(xì)胞的凋亡
　　1、過表達(dá)PEG3可以抑制HTR8-SVNEO細(xì)胞的凋亡水平。
　　2、過表達(dá)PEG3可以降低Caspase3蛋白水平及mRNA水平的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1、PEG3的表達(dá)在正常發(fā)育的絨毛中表達(dá)高于胚停發(fā)育的絨毛組織。
　　2、PEG3通過影響CyclinD1和p21的表達(dá)，促進HTR8-SVNEO細(xì)胞G1/S期的