德昌松毛蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)及昆蟲(chóng)細(xì)胞庫(kù)管理系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn).pdf

1、昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是近年來(lái)迅速發(fā)展起來(lái)的細(xì)胞工程中的主要領(lǐng)域之一，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)及生物學(xué)的各個(gè)方面。本文以鱗翅目(Lepidoptera)枯葉蛾科(Lasiocampidae)松毛蟲(chóng)屬(Dendrolimus Germer)的德昌松毛蟲(chóng)(Dendrolimus punctatus tehchangensis Tsai)為試驗(yàn)材料，對(duì)其血淋巴細(xì)胞、卵巢組織、胚以及新孵幼蟲(chóng)組織進(jìn)行了體外培養(yǎng)試驗(yàn)。同時(shí)，研究開(kāi)發(fā)了適合昆蟲(chóng)細(xì)胞庫(kù)管理的計(jì)算

2、機(jī)管理系統(tǒng)，為實(shí)現(xiàn)昆蟲(chóng)細(xì)胞庫(kù)長(zhǎng)期規(guī)范有效的管理奠定了基礎(chǔ)。主要試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1、德昌松毛蟲(chóng)組織的細(xì)胞培養(yǎng)
　　本研究摸索了德昌松毛蟲(chóng)組織體外培養(yǎng)的各種條件，得出一套針對(duì)其各種組織的適宜的培養(yǎng)方法，并使細(xì)胞在體外增殖并存活較長(zhǎng)時(shí)間。
　?。?）培養(yǎng)基：通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，Grace、MGM-450、MM、TNM-FH等4種昆蟲(chóng)培養(yǎng)基均適用于德昌松毛蟲(chóng)血淋巴細(xì)胞、卵巢細(xì)胞、胚細(xì)胞以及新孵幼蟲(chóng)細(xì)胞的培養(yǎng)。
　?。?）德

3、昌松毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)：采用靜置法收集血淋巴細(xì)胞，將初始密度控制在0.27×106～0.53×106個(gè)/mL之間可取得較好培養(yǎng)效果。培養(yǎng)的細(xì)胞由圓形懸浮生長(zhǎng)型、圓形貼壁生長(zhǎng)型、梭形貼壁生長(zhǎng)型、多邊形貼壁生長(zhǎng)型細(xì)胞以及網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)細(xì)胞等5種不同類型的細(xì)胞組成。通過(guò)換液培養(yǎng)，松毛蟲(chóng)血淋巴細(xì)胞可在體外存活1年以上。
　?。?）德昌松毛蟲(chóng)蛹卵巢細(xì)胞培養(yǎng)：選取卵巢管端絲和生殖區(qū)部分（長(zhǎng)約5mm），使用胰蛋白酶消化和機(jī)械剪切相結(jié)合的方法離散組

4、織能取得較好的培養(yǎng)效果。培養(yǎng)物由圓形懸浮生長(zhǎng)型、圓形貼壁生長(zhǎng)型，以及多邊形貼壁生長(zhǎng)型等3種不同類型細(xì)胞組成。通過(guò)換液培養(yǎng)，卵巢細(xì)胞可在體外最長(zhǎng)存活1年以上，并傳代3次。
　?。?）德昌松毛蟲(chóng)胚和新孵幼蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)：通過(guò)篩選發(fā)現(xiàn)，胰蛋白酶消化法適用于德昌松毛蟲(chóng)胚的組織離散處理，得到圓形懸浮生長(zhǎng)型、圓形貼壁生長(zhǎng)型，以及梭形貼壁生長(zhǎng)型3種不同類型細(xì)胞。通過(guò)換液培養(yǎng)，胚細(xì)胞在體外已存活8個(gè)月以上，并傳代2次；新孵幼蟲(chóng)組織使用酶消化法處理后有

5、圓形懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞從組織塊遷出。通過(guò)換液培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，新孵幼蟲(chóng)細(xì)胞在體外增殖緩慢，不易進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
　　對(duì)比后發(fā)現(xiàn)，蛹卵巢和胚組織細(xì)胞更易于培養(yǎng)且有可能獲得連續(xù)增殖的細(xì)胞系。
　　2、昆蟲(chóng)細(xì)胞庫(kù)管理系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)
　　針對(duì)目前昆蟲(chóng)細(xì)胞庫(kù)日常維護(hù)工作中在數(shù)據(jù)和資料管理方面存在的不足，使用Microsoft Visual Basic2005軟件開(kāi)發(fā)工具與Microsoft SQL Server2005數(shù)據(jù)庫(kù)管理系統(tǒng)等工具構(gòu)

6、建了一套昆蟲(chóng)細(xì)胞庫(kù)管理系統(tǒng)，分為兩大子功能系統(tǒng)，10個(gè)功能模塊。
　?。?）細(xì)胞凍存與復(fù)蘇檔案管理子系統(tǒng)：通過(guò)4個(gè)功能模塊實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞凍存與復(fù)蘇操作的全程監(jiān)控，能夠?qū)崿F(xiàn)數(shù)據(jù)的添加、修改、刪除、檢索、統(tǒng)計(jì)，并實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞復(fù)蘇操作定時(shí)提醒等功能。
　?。?）細(xì)胞檔案管理子系統(tǒng)：通過(guò)6個(gè)功能模塊實(shí)現(xiàn)對(duì)各細(xì)胞系相關(guān)數(shù)據(jù)，包括圖片、文檔、資料，以及各種實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)一管理及保存，并可對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行添加、修改、刪除、導(dǎo)出等相關(guān)操作。
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