新娃兒藤堿類似物抗腫瘤作用及其機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　天然產(chǎn)物是抗腫瘤藥物的重要來(lái)源之一。娃兒藤堿最初是從印度娃兒藤中分離得到的生物堿，研究表明這類生物堿具有強(qiáng)大的抗腫瘤、抗炎和抗病毒等作用。其中代表性的娃兒藤堿類似物DCB-3503對(duì) NCI抗腫瘤候選化合物篩選平臺(tái)中59株腫瘤細(xì)胞的平均生長(zhǎng)抑制IC50（GI50）為10-8 M左右，并且抑制多藥耐藥腫瘤細(xì)胞的增殖，對(duì)其進(jìn)行COMPARE分析提示這類化合物與已知抗腫瘤藥物的作用機(jī)制不同。目前還沒有該類化合物進(jìn)入臨床使用或

2、者正在進(jìn)行臨床研究。密花娃兒藤堿作為抗腫瘤候選化合物曾一度進(jìn)入臨床Ⅰ期研究，但因其嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)毒性而被迫終止。盡管國(guó)內(nèi)外對(duì)其抗腫瘤機(jī)制已有較多報(bào)道，但其確切作用靶點(diǎn)仍不十分明確。因此，發(fā)現(xiàn)高效低毒的新類似物并探索其作用機(jī)制對(duì)于這類化合物的研究開發(fā)具有重要意義。
　　目的：
　　通過(guò)與南開大學(xué)汪清民教授實(shí)驗(yàn)室合作，對(duì)娃兒藤堿類似物進(jìn)行構(gòu)效關(guān)系研究，旨在尋找更為有效的類似物。探索其抗腫瘤作用機(jī)制，揭示其新的抗腫瘤作用特點(diǎn)。

3、r>　　方法：
　　首先以 DCB-3503為先導(dǎo)化合物經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)修飾合成菲并吲哚里西啶類化合物和菲并喹諾里西啶類化合物，采用SRB法和 MTT法對(duì)這兩類化合物進(jìn)行初步活性篩選；選擇兩個(gè)系列化合物中活性最高的化合物WM-12和Mchs-6R作為代表化合物，檢測(cè)其抗腫瘤譜；利用IncuCyte Zoom系統(tǒng)檢測(cè)化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制；采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞克隆形成能力的抑制；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)化合物對(duì)細(xì)胞周期分布的影

4、響，并進(jìn)一步利用 Aphdicolin同步化細(xì)胞周期后考察化合物對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)程的影響；采用BrdU標(biāo)記法檢測(cè)化合物對(duì)細(xì)胞DNA合成的影響；采用Western Blot法檢測(cè)化合物對(duì)細(xì)胞DNA損傷和自噬相關(guān)蛋白的影響；采用Annexin V/PI雙染法檢測(cè)化合物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力；采用臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)化合物引發(fā)細(xì)胞死亡的作用。
　　結(jié)果：
　　體外抗腫瘤活性篩選結(jié)果顯示菲并吲哚里西啶類化合物WM-12和菲并喹諾里西啶類化合物M

5、chs-6R活性較強(qiáng)，WM-12和Mchs-6R能顯著抑制血液腫瘤及多種實(shí)體瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，具有廣譜的細(xì)胞增殖抑制活性。WM-12對(duì)31株腫瘤細(xì)胞的平均IC50值為18.7 nM，Mchs-6R對(duì)30株人腫瘤細(xì)胞的平均IC50為2.1 nM，均顯著優(yōu)于先導(dǎo)化合物DCB-3503（平均IC50=165.4 nM）。WM-12和Mchs-6R顯著抑制BEL-7402細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖及克隆形成。WM-12和Mchs-6R可誘導(dǎo)細(xì)胞S期阻滯進(jìn)而延長(zhǎng)

6、周期進(jìn)程。進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)WM-12和Mchs-6R能顯著抑制DNA的合成，但不能引起 DNA發(fā)生顯著的斷裂?；衔锊荒苷T導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬；且高劑量化合物長(zhǎng)時(shí)間作用細(xì)胞不能顯著誘導(dǎo)凋亡或死亡。WM-12和Mchs-6R還具抗多藥耐藥作用，對(duì)多種耐藥細(xì)胞的增殖抑制活性與對(duì)應(yīng)親本細(xì)胞接近，耐藥系數(shù)值在1左右；化合物濃度依賴性地阻滯耐藥細(xì)胞的周期進(jìn)展。
　　結(jié)論：
　　新娃兒藤堿類似物菲并吲哚里西啶類化合物WM-12和菲并喹諾里西啶類