卵葉娃兒藤生物堿的提取分離、類似物的合成及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、卵葉娃兒藤(Tylophora ovata(Lindl.)Hook.ex Steud.)屬于蘿摩科(Asclepiadaceac)娃兒藤屬(Tylophora)多年生匍匐性藤狀草本，是中國(guó)傳統(tǒng)的有毒中草藥，這類植物為我國(guó)華南及西南地區(qū)常用的民間草藥，娃兒藤堿類屬于菲并吲哚里西定類生物堿，廣泛存在于卵葉娃兒藤、老瓜頭、牛心樸子等植物中，是一類具有高抗腫瘤活性的化合物，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的抑制作用。本論文研究了卵葉娃兒藤總生物堿提取工藝、具

2、有抗腫瘤活性的卵葉娃兒藤生物堿及其類似物的合成與結(jié)構(gòu)修飾，并對(duì)所得娃兒藤堿及其類似物用細(xì)胞學(xué)方法進(jìn)行了抗腫瘤活性初步研究。
　　 1.研究了有機(jī)溶劑法、超臨界CO2提取法和微波輔助提取法提取卵葉娃兒藤總生物堿的工藝，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)化，確立了溶劑法最佳工藝條件為：乙醇濃度90％、固液比1∶25、提取溫度80℃、提取2次、每次2h，卵葉娃兒藤總生物堿的得率可達(dá)0.388％；超臨界CO2提取法最佳工藝條件為：萃取溫度5

3、0℃、萃取壓力25MPa、萃取時(shí)間90 min、夾帶劑(95％乙醇)用量2.5mL/g，卵葉娃兒藤總生物堿的得率為0.25％；微波輔助提取法最佳工藝條件為：提取溫度70℃、乙醇濃度90％、固液比1∶20、提取時(shí)間15min，卵葉娃兒藤總生物堿的得率可達(dá)0.438％。相比而言，微波輔助提取的得率最高，有機(jī)溶劑提取法次之，超臨界CO2提取法最低。
　　 2.以藜蘆醛、胡椒醛、3,4一二甲氧基苯乙酸、胡椒乙酸、(S)-L-脯氨酸等易得

4、的原料為起始原料，以經(jīng)典的Friedel-Crafts等反應(yīng)為關(guān)鍵步驟，設(shè)計(jì)、合成了含有亞甲二氧基的對(duì)稱性菲和不對(duì)稱性菲的娃兒藤堿及其類似物：先合成α，β-二芳基丙烯酸(腈)，再用亞碘酰苯二乙酯(PIDA)對(duì)其關(guān)環(huán)成多取代基的9-羧基菲，然后脫去羧基，再和(S)-N-(三氟乙酰)-L-脯氨酰氯發(fā)生Friedel-Crafts反應(yīng)得到多取代基-9-L-脯氨?；疲a(chǎn)物在三氟化硼乙醚存在下用三乙基硅烷還原羰基，然后脫去三氟乙酰保護(hù)基，最后在

5、鹽酸存在下用甲醛閉環(huán)得到目標(biāo)產(chǎn)物。并以反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、物料比、催化劑的種類和用量等因數(shù)，對(duì)合成過(guò)程中關(guān)鍵步驟的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化。研究了氧化偶聯(lián)條件和脫羧條件對(duì)得率的影響，以PIDA替代VOF3、VOCl3試劑和紫外光照等偶聯(lián)關(guān)環(huán)，試劑易于制備，反應(yīng)條件溫和，可操作性強(qiáng)，產(chǎn)率提高。用IR、1H NMR、MS和X射線單晶衍射儀等對(duì)目標(biāo)化合物和部分中間體的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。
　　 3.以娃兒藤堿、類似物及卵葉娃兒藤總生物堿進(jìn)行了體

6、外抗腫瘤試驗(yàn)的初步研究，多角度研究了娃兒藤堿及類似物和總生物堿(TOHa)的體外抗腫瘤的作用。用MTT法檢測(cè)了TOHa、娃兒藤堿、2,3,6,7-二亞甲二氧基-菲-9-[9，10-b]吲哚里西啶(BMPI)及DMPI對(duì)A549，HeLa，MGC-803，SGC-7091，SMMC-7721五種人腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；用SPL檢測(cè)、集落形成法檢測(cè)BMPI對(duì)正常細(xì)胞生長(zhǎng)及對(duì)A549細(xì)胞增殖能力的影響；用倒置顯微鏡、電鏡、Gimesa染色法觀察