卵葉娃兒藤生物堿的提取分離、類似物的合成及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、卵葉娃兒藤(Tylophora ovata(Lindl.)Hook.ex Steud.)屬于蘿摩科(Asclepiadaceac)娃兒藤屬(Tylophora)多年生匍匐性藤狀草本，是中國傳統(tǒng)的有毒中草藥，這類植物為我國華南及西南地區(qū)常用的民間草藥，娃兒藤堿類屬于菲并吲哚里西定類生物堿，廣泛存在于卵葉娃兒藤、老瓜頭、牛心樸子等植物中，是一類具有高抗腫瘤活性的化合物，對腫瘤細胞具有明顯的抑制作用。本論文研究了卵葉娃兒藤總生物堿提取工藝、具

2、有抗腫瘤活性的卵葉娃兒藤生物堿及其類似物的合成與結(jié)構(gòu)修飾，并對所得娃兒藤堿及其類似物用細胞學(xué)方法進行了抗腫瘤活性初步研究。
　　 1.研究了有機溶劑法、超臨界CO2提取法和微波輔助提取法提取卵葉娃兒藤總生物堿的工藝，對實驗條件進行了正交設(shè)計試驗優(yōu)化，確立了溶劑法最佳工藝條件為：乙醇濃度90％、固液比1∶25、提取溫度80℃、提取2次、每次2h，卵葉娃兒藤總生物堿的得率可達0.388％；超臨界CO2提取法最佳工藝條件為：萃取溫度5

3、0℃、萃取壓力25MPa、萃取時間90 min、夾帶劑(95％乙醇)用量2.5mL/g，卵葉娃兒藤總生物堿的得率為0.25％；微波輔助提取法最佳工藝條件為：提取溫度70℃、乙醇濃度90％、固液比1∶20、提取時間15min，卵葉娃兒藤總生物堿的得率可達0.438％。相比而言，微波輔助提取的得率最高，有機溶劑提取法次之，超臨界CO2提取法最低。
　　 2.以藜蘆醛、胡椒醛、3,4一二甲氧基苯乙酸、胡椒乙酸、(S)-L-脯氨酸等易得

4、的原料為起始原料，以經(jīng)典的Friedel-Crafts等反應(yīng)為關(guān)鍵步驟，設(shè)計、合成了含有亞甲二氧基的對稱性菲和不對稱性菲的娃兒藤堿及其類似物：先合成α，β-二芳基丙烯酸(腈)，再用亞碘酰苯二乙酯(PIDA)對其關(guān)環(huán)成多取代基的9-羧基菲，然后脫去羧基，再和(S)-N-(三氟乙酰)-L-脯氨酰氯發(fā)生Friedel-Crafts反應(yīng)得到多取代基-9-L-脯氨酰基菲，產(chǎn)物在三氟化硼乙醚存在下用三乙基硅烷還原羰基，然后脫去三氟乙酰保護基，最后在

5、鹽酸存在下用甲醛閉環(huán)得到目標(biāo)產(chǎn)物。并以反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、物料比、催化劑的種類和用量等因數(shù)，對合成過程中關(guān)鍵步驟的實驗條件進行了優(yōu)化。研究了氧化偶聯(lián)條件和脫羧條件對得率的影響，以PIDA替代VOF3、VOCl3試劑和紫外光照等偶聯(lián)關(guān)環(huán)，試劑易于制備，反應(yīng)條件溫和，可操作性強，產(chǎn)率提高。用IR、1H NMR、MS和X射線單晶衍射儀等對目標(biāo)化合物和部分中間體的結(jié)構(gòu)進行了表征。
　　 3.以娃兒藤堿、類似物及卵葉娃兒藤總生物堿進行了體

6、外抗腫瘤試驗的初步研究，多角度研究了娃兒藤堿及類似物和總生物堿(TOHa)的體外抗腫瘤的作用。用MTT法檢測了TOHa、娃兒藤堿、2,3,6,7-二亞甲二氧基-菲-9-[9，10-b]吲哚里西啶(BMPI)及DMPI對A549，HeLa，MGC-803，SGC-7091，SMMC-7721五種人腫瘤細胞生長的影響；用SPL檢測、集落形成法檢測BMPI對正常細胞生長及對A549細胞增殖能力的影響；用倒置顯微鏡、電鏡、Gimesa染色法觀察