脾氨肽對結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺疾病的治療作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　間質(zhì)性肺疾?。╥nterstitial lung disease，ILD）是一組主要累及肺間質(zhì)和肺泡腔，導(dǎo)致肺泡-毛細(xì)血管功能單位喪失的彌漫性肺疾病，包括200多種急性和慢性肺部疾病，其中，結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺疾病(interstitial lung disease associated with connective tissue diseases，CTD-ILD)是臨床最常見的間質(zhì)性肺疾病。目前對CTDs發(fā)生 I

2、LD的病因和機(jī)制尚不清楚，傳統(tǒng)的免疫抑制劑與激素抗炎并不能阻止病情進(jìn)展,間質(zhì)性肺炎、肺纖維化的進(jìn)行性惡化，是CTD-ILD主要的死亡原因。
　　研究表明，機(jī)體免疫系統(tǒng)異常激活及免疫耐受缺陷在間質(zhì)性肺疾病患者體內(nèi)普遍存在，具有殺傷活性的 CD8+T、NK、NKT細(xì)胞過度激活和調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞（Treg）數(shù)量和功能缺陷可能在 CTD-ILD發(fā)病中具有重要的地位。近來有研究發(fā)現(xiàn)，皰疹病毒家族成員—人類巨細(xì)胞病毒（human cytomeg

3、alovirus,HCMV）是肺纖維化發(fā)展的抗原性刺激因子，其隱匿感染通過誘導(dǎo)持續(xù)性固有免疫炎癥反應(yīng)，也可能參與了間質(zhì)性肺疾病的發(fā)生發(fā)展。我們實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn)，CTD-ILD患者血中HCMV-DNA檢出率明顯高于正常人，且發(fā)現(xiàn)HCMV感染是患者對藥物治療反應(yīng)不良及ILD預(yù)后不佳的一個重要原因。然而，傳統(tǒng)的抗病毒治療并不顯示對間質(zhì)性肺疾病的改善湊效。這提示：應(yīng)用某些具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用的制劑，在抑制病毒復(fù)制的同時(shí)具有調(diào)節(jié)恢復(fù)機(jī)體正常的

4、免疫微環(huán)境的作用，可能是治療這一類疾病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
　　脾氨肽是從新鮮豬脾臟中提取的一種含有多肽、核苷酸類小分子免疫調(diào)節(jié)劑，研究表明其具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用，可用于治療細(xì)胞免疫功能低下、免疫缺陷、自身免疫功能紊亂性和病毒性疾病等，臨床上用于反復(fù)呼吸道感染的哮喘患兒及COPD患者獲得良好效果，但尚未有用于間質(zhì)性肺疾病治療的報(bào)道?；诖?，本研究擬通過觀察常規(guī)方案聯(lián)合應(yīng)用脾氨肽對CTD-ILD患者的臨床療效，并從免疫學(xué)角度探討其發(fā)揮作用的

5、機(jī)制，旨在為自身免疫相關(guān)間質(zhì)性肺疾病的治療探索新的有效治療方法。
　　方法:
　　第一部分脾氨肽輔助治療結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺疾病的臨床療效觀察
　　將符合入選條件的90名CTD-ILD患者隨機(jī)分為常規(guī)治療組(44人)和聯(lián)合脾氨肽治療組（46人）。常規(guī)治療組予激素抗炎、化痰及吸氧等常規(guī)治療，聯(lián)合脾氨肽治療組在常規(guī)治療組治療基礎(chǔ)上加用脾氨肽口服凍干粉治療12周。比較兩組治療前后肺部高分辨 CT（HRCT）評分、肺功能指標(biāo)

6、（FVC％和 DLCO%）及血清學(xué)指標(biāo)（ES R、C RP、RF、補(bǔ)體 C3、C4、肌酸激酶等）的變化；同時(shí)監(jiān)測兩組病人中感染HCMV的陽性患者經(jīng)治療后病毒的陰轉(zhuǎn)情況，比較兩組的陰轉(zhuǎn)率并隨訪治療后6個月內(nèi)呼吸道感染情況，同時(shí)觀察脾氨肽治療過程中有無不良反應(yīng)的發(fā)生。
　　第二部分脾氨肽輔助治療結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺疾病的免疫機(jī)制探討
　　兩組患者治療前抽取外周靜脈抗凝血標(biāo)本，采用流式細(xì)胞術(shù)對CD3+CD4+,CD3+CD8+,

7、CD3+CD56+(NKT),CD4+CD25+Foxp3+(Treg)淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測，并采用液相芯片和Elisa方法對兩組患者血漿細(xì)胞因子 IL-6、IL-10、IL-17、IFN-γ、IP-10、TGF-β進(jìn)行檢測，同時(shí)收集33名健康體檢者靜脈血標(biāo)本進(jìn)行上述淋巴亞群及細(xì)胞因子水平檢測并與 CTD-ILD患者進(jìn)行對比分析以明確這類患者體內(nèi)的免疫狀況。90名患者經(jīng)12周治療后對上述淋巴亞群及細(xì)胞因子再次檢測，然后對各組治療前后上述

8、免疫學(xué)指標(biāo)的變化情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　第一部分脾氨肽輔助治療結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺疾病的臨床療效觀察
　　治療前兩組FVC%、DLCO%及HRCT評分無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），經(jīng)過12周治療后，脾氨肽治療組FVC%、DLCO%較治療前明顯上升， HRCT評分明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05）；而常規(guī)治療組上述指標(biāo)較治療前后變化不明顯。脾氨肽聯(lián)合治療組血沉、類風(fēng)濕因子、肌酸激酶及免疫球蛋白 I

9、gG、IgA較治療前明顯下降，治療前后各指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），C-反應(yīng)蛋白、補(bǔ)體C3、C4及乳酸脫氫酶也較治療前有所下降。在常規(guī)治療組中也伴有類風(fēng)濕因子的下降，而血沉、乳酸脫氫酶等其他指標(biāo)或升高或較前無明顯改變。90名患者治療前經(jīng)Q-PCR法檢測HCMV共檢出40例陽性患者；其中脾氨肽治療組22人，常規(guī)治療組18人；治療后發(fā)現(xiàn)脾氨肽組22位HCMV陽性者中有16人轉(zhuǎn)為陰性，陰轉(zhuǎn)率為72.7%；常規(guī)治療組18名陽性患者僅有

10、5人轉(zhuǎn)陰，陰轉(zhuǎn)率27.8%(P<0.05)。治療后隨訪6個月期間，聯(lián)合脾氨肽組呼吸道感染發(fā)生率（17.4%）顯著低于單獨(dú)常規(guī)治療組（38.6%），脾氨肽治療未見明顯不良反應(yīng)。
　　第二部分脾氨肽輔助治療結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺疾病的免疫機(jī)制探討
　　治療前90例 CTD-ILD患者與33例健康對照者免疫功能對比分析發(fā)現(xiàn)：CTD-ILD患者的 CD3+CD8+,CD3+CD56+NKT, CD3+CD8+/Treg、CD3+CD

11、56+NKT/Treg、 IL-6、IL-10、IL-17、IFN-γ較健康對照組明顯升高（P均<0.05），而CD4+/CD8+,IP-10則明顯低于對照組(P均<0.05)，伴有Treg的降低。治療12周后聯(lián)合脾氨肽治療組Tre g、IFN-γ，IP-10，TGF-β/IL-6水平較治療前明顯升高（P<0.05）,NKT、NKT/Treg，IL-6、IL-17水平較前明顯降低（P<0.05）。而常規(guī)組治療后Treg沒有改變，NKT、

12、IL-6、IL-10、IL-17水平較前不降反而升高（P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用脾氨肽能夠抑制 HCMV病毒復(fù)制，改善CTD-ILD患者肺功能和緩解影像學(xué)間質(zhì)性肺疾病病理改變；與此同時(shí)減少呼吸道感染。
　　2.聯(lián)合應(yīng)用脾氨肽促進(jìn)了 IFN-γ分泌，并降低了 IL-10水平，進(jìn)而能抑制HCMV復(fù)制；同時(shí)通過下調(diào) IL-6、IL-17等促纖維化促炎細(xì)胞因子的釋放，誘導(dǎo)Tre g細(xì)胞分化