青島文昌魚18SrDNA和L19及S19核糖體蛋白基因定位的研究.pdf

1、本文首次將熒光原位雜交技術(shù)(Fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)用于青島文昌魚染色體基因定位研究，確立了青島文昌魚染色體熒光原位雜交的技術(shù)體系，并且對(duì)18S rDNA和核糖體蛋白L19和S19基因進(jìn)行了染色體基因定位及熒光顯帶基因定位的研究。 青島文昌魚雜交體系為：鮭魚精DNA超聲波打斷處理20min；采用5 ng/μL的蛋白酶K處理3～5 min和10 ng/μL RNA酶處理1h進(jìn)

2、行預(yù)處理；封閉DNA采用100～300倍探針濃度的鮭魚精DNA；50％甲酰胺/2×SSC，1×SSC，2×SSC，42℃的洗脫嚴(yán)緊度；3％BSA進(jìn)行抗體封閉；雜交溫度保持37℃；雜交時(shí)間可以控制在12～18 h之內(nèi)；PI復(fù)染量20μl/片。 青島文昌魚18S rDNA染色體FISH基因定位信號(hào)數(shù)為2～6個(gè)，主要分布于4條染色體上：1號(hào)染色體近著絲粒區(qū)，2號(hào)染色體長臂近末端區(qū)，8號(hào)染色體長臂中部，12號(hào)染色體著絲粒區(qū)。同一染色體雜

3、交信號(hào)檢出頻率不同，熒光信號(hào)強(qiáng)弱也不同。2號(hào)、8號(hào)、12號(hào)雜交信號(hào)較強(qiáng)，1號(hào)雜交信號(hào)較弱。12號(hào)染色體信號(hào)檢出頻率最高，8號(hào)次之，1號(hào)和2號(hào)檢出頻率較低。在8號(hào)和12號(hào)染色體的兩條同源染色體上均可以同時(shí)檢測到信號(hào)。1號(hào)染色體通常只在一條同源染色體上檢測rDNA熒光信號(hào)。2號(hào)染色體因?yàn)榭赡転樾匀旧w，染色體差異較大，因此定位結(jié)果也不一致。 青島文昌魚染色體熒光顯帶結(jié)果顯示DAPI帶與文昌魚C帶近似，表明文昌魚染色體異染色質(zhì)區(qū)含AT