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文檔簡介
1、在哺乳動(dòng)物中,甲硫氨酸(Met)是種必需的氨基酸,通過轉(zhuǎn)硫作用,先形成同型半胱氨酸(Hcy),再轉(zhuǎn)化為半胱氨酸(Cys)。Hcy經(jīng)過兩步反應(yīng)生成半胱氨酸。第一步在胱硫醚β-合酶(cystathionine beta-synthase,CBS)的作用下與絲氨酸(Ser)縮合成胱硫醚,第二步,胱硫醚在γ-裂解酶的作用下形成半胱氨酸。CBS在人體內(nèi)轉(zhuǎn)硫作用中起到至關(guān)重要的作用。最近幾年的研究發(fā)現(xiàn),高Hcy血癥是導(dǎo)致心血管疾病的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素
2、。在正常情況下,CBS可使Hcy與Ser縮合為胱硫醚,代謝掉多余的Hcy。當(dāng)CBS活性下降時(shí),便引起Hcy堆積,導(dǎo)致高Hcy血癥。
構(gòu)建了重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-CBS,然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coli BL21(DE3)。通過對(duì)誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化,25℃,IPTG濃度為0.2mM,誘導(dǎo)12h,表達(dá)出可溶蛋白。經(jīng)兩次Sephrose-鎳親和層析柱純化和G-25脫鹽,thrombin酶切,由SDS-PAGE鑒定產(chǎn)物的分子量約63
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