對分別轉(zhuǎn)有MxIRT1及OsNramp1的轉(zhuǎn)基因酵母進行的蛋白質(zhì)組及轉(zhuǎn)錄本組分析.pdf

1、MxlRTl和OsNrampl分別是從小金海棠和水稻根中克隆得到的金屬轉(zhuǎn)運蛋白。異源功能互補實驗證明兩種基因均可以互補酵母雙突變體角t3fet4中鐵的吸收。本研究從蛋白質(zhì)組和轉(zhuǎn)錄本組兩個水平對基因及其引起的變化進行研究。 研究的第一部分利用蛋白質(zhì)雙向電泳及肽質(zhì)量指紋譜技術分別對過鐵及缺鐵條件下的轉(zhuǎn)IRT菌株、正常鐵處理條件下的轉(zhuǎn)Nramp及轉(zhuǎn)空載體菌株、正常鐵處理及缺鐵處理條件下分別轉(zhuǎn)有空載體、IRT及Nramp的酵母菌株進行

2、了蛋白質(zhì)組分析。通過蛋白質(zhì)雙向電泳技術每種處理條件下的酵母菌株均可分離得到1500個左右的蛋白點。其中對過鐵及缺鐵條件下的轉(zhuǎn)IRT菌株檢索得到8個差異蛋白，分別與細胞骨架、分子伴侶、氨基酸合成，甘油合成等相關；正常鐵處理條件下的轉(zhuǎn)Nramp及轉(zhuǎn)空載體菌株中檢索得到9個差異蛋白，分別與分子伴侶、糖代謝、亞精胺合成、抗氧化作用等相關；對正常鐵處理及缺鐵處理條件下分別轉(zhuǎn)有空載體、IRT及Nramp的酵母菌株檢索得到11個差異蛋白，除1個為功能

3、未知蛋白外，其它10個差異分別是與糖代謝、蛋白質(zhì)的生物合成、細胞抗毒害、膜泡運輸及信號轉(zhuǎn)導相關的蛋白。 研究的第二部分利用基因芯片技術對正常鐵處理條件下分別轉(zhuǎn)有空載體、IRT及Nramp的酵母菌株進行了轉(zhuǎn)錄本組分析。提取酵母總RNA，通過反轉(zhuǎn)錄標記生物素，進行酵母10928個eDNA的芯片雜交。其中，轉(zhuǎn)IRT菌株相對于轉(zhuǎn)空載體菌株上調(diào)表達的基因為1200個，下調(diào)表達的基因為1140個；轉(zhuǎn)Nramp菌株相對于轉(zhuǎn)空載體菌株上調(diào)表達

4、的基因為290個，下調(diào)表達的基因為108個。對轉(zhuǎn)Nramp菌株中差異性較為顯著的27個上調(diào)表達基因和45個下調(diào)表達基因進行分析發(fā)現(xiàn)，上調(diào)表達基因多為與鋅指結(jié)構(gòu)相關、與RNA結(jié)合、調(diào)節(jié)子或抑制子和高滲誘導表達基因，下調(diào)表達基因多為與膜泡運輸、細胞通訊、細胞周期和蛋白質(zhì)的合成相關。 推測在轉(zhuǎn)基因酵母中，由于IRT或是Nramp的轉(zhuǎn)入，單基因多效作用比較明顯。除了DNA復制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成、氧化呼吸作用等效應有明顯的變化外，