microRNA-21缺失在胸主動(dòng)脈瘤中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分 MicroRNA-21通過(guò)調(diào)節(jié)TGF-β-Smad3信號(hào)促進(jìn)血管緊張素Ⅱ所致胸主動(dòng)脈瘤形成的作用及其機(jī)制研究
　　目的：驗(yàn)證在胸主動(dòng)脈瘤中 microRNA-21在病變中的變化規(guī)律，探究干預(yù)microRNA-21在胸主動(dòng)脈瘤中的作用。
　　方法：使用血管緊張素Ⅱ灌注Smad3+/-雜合子小鼠建立胸主動(dòng)脈瘤模型，RT-PCR和原位雜交方法檢測(cè)形成胸主動(dòng)脈瘤組織中的microRNA-21表達(dá)的時(shí)空變化。同時(shí)檢測(cè)臨床患者

2、中microRNA-21表達(dá)量及部位的變化。之后引入miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠進(jìn)行胸主動(dòng)脈瘤模型復(fù)制，小鼠B超觀察其血管擴(kuò)張、動(dòng)脈瘤形成等病變特點(diǎn)。組織學(xué)檢測(cè)病變局部的病理特點(diǎn)，并檢測(cè)TGF-β相關(guān)下游信號(hào)通路的活化情況。體外培養(yǎng)平滑肌，驗(yàn)證其對(duì)TGF-β的反應(yīng)性。
　　結(jié)果：在Smad3+/-雜合子小鼠中灌注血管緊張素Ⅱ，能夠誘導(dǎo)雜合子小鼠發(fā)生胸主動(dòng)脈瘤。并且通過(guò)RT-PCR、原位雜交方法發(fā)現(xiàn)，microRNA

3、-21升高主要表達(dá)于血管中層平滑肌內(nèi)。與臨床標(biāo)本檢測(cè)的microRNA-21表達(dá)部位相符。在對(duì)microRNA-21進(jìn)行敲除后，雙敲小鼠產(chǎn)生了明顯的胸主動(dòng)脈瘤。并且該動(dòng)脈瘤的發(fā)生快于Smad3+/-雜合子小鼠，升主動(dòng)脈擴(kuò)張明顯，夾層發(fā)生早，破裂死亡率高。在HE、EVG切片中發(fā)現(xiàn)，血管直徑擴(kuò)張，血管中層平滑肌增厚，彈力纖維在病變局部降解。免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在雙敲小鼠中，血管平滑肌中 pSMAD2水平明顯下降。體外實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，雙敲小鼠的原代

4、平滑肌，對(duì)TGF-β的反應(yīng)性明顯降低，其下游靶蛋白表達(dá)同樣減低。
　　結(jié)論：在胸主動(dòng)脈瘤中，microRNA-21在血管中層平滑肌中明顯升高，下調(diào)microRNA-21能加重胸主動(dòng)脈瘤的發(fā)生。其機(jī)制可能與平滑肌細(xì)胞中 TGF-β通路受到抑制有關(guān)。
　　第二部分 SMAD7調(diào)控TGF-β信號(hào)通路與動(dòng)脈瘤發(fā)生的作用及其機(jī)制研究
　　目的：了解miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠胸主動(dòng)脈瘤的發(fā)病機(jī)制，通過(guò)干預(yù)Smad

5、7緩解胸主動(dòng)脈瘤發(fā)病。
　　方法：對(duì) miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠動(dòng)脈瘤組織進(jìn)行免疫組化、RT-PCR檢測(cè)，探究平滑肌表型轉(zhuǎn)換相關(guān)的收縮分子αSMA、SM22、SM-MHC，炎癥因子 CCL2，CXCL12，IL-6等了解血管平滑肌在動(dòng)脈瘤發(fā)生時(shí)的表型轉(zhuǎn)換程度。并在體外和體內(nèi)利用病毒轉(zhuǎn)染Smad7抑制序列解除microRNA-21敲除對(duì)SMAD通路的抑制作用，從而抑制胸主動(dòng)脈瘤形成。
　　結(jié)果：miR-21-

6、/-:Smad3+/-雙敲小鼠的胸主動(dòng)脈瘤中，平滑肌細(xì)胞因?yàn)檫^(guò)分抑制的TGF-β通路導(dǎo)致發(fā)生表型轉(zhuǎn)換。其表現(xiàn)為收縮分子αSMA、SM22、SM-MHC下調(diào)和炎癥相關(guān)分子 CCL2，CXCL12，IL-6上調(diào)。同時(shí)，上調(diào)的炎癥分子誘導(dǎo)炎性細(xì)胞向病變局部趨化。當(dāng)使用si Smad7慢病毒進(jìn)行轉(zhuǎn)染后，TGF-β信號(hào)活化水平提高，血管平滑肌表現(xiàn)轉(zhuǎn)換得到抑制，胸主動(dòng)脈瘤病變得到改善。
　　結(jié)論：miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠動(dòng)