長(zhǎng)效尿酸酶（URICASE-PEG40KD結(jié)合物）的制備及基本性質(zhì)研究.pdf

1、目的：制備尿酸酶-PEG結(jié)合物并考察其天然尿酸酶和尿酸酶-PEG的基本特性。 方法：本文采用蛋白質(zhì)化學(xué)修飾技術(shù)，選擇分子量40,000聚乙二醇作為專(zhuān)一性修飾劑來(lái)修飾尿酸酶(60 KD)。探討pH、溫度、Uricase與PEG化學(xué)計(jì)量關(guān)系等因素對(duì)修飾反應(yīng)的影響，以此確定了修飾反應(yīng)的最適條件；采用Superdcx 75分子篩層析分離純化修飾產(chǎn)物Uricasc-PEG；用SDS-PAGE、梯度凝膠電泳等方法對(duì)尿酸酶-PEG的純度和分

2、子量進(jìn)行了分析；采用TNBS法測(cè)定了修飾程度；采用常規(guī)酶學(xué)分析方法，分別探討天然修飾Uricase和Uricase-PEG的一些基本動(dòng)力學(xué)特性。 結(jié)果：PEG修飾Uricase的最適反應(yīng)條件確定為pH 8.5 0.2 mol/L硼酸緩沖液，25.0℃(或室溫)，尿酸酶：PEG-NHS=1：20(W/W)，反應(yīng)時(shí)間為30min，終止反應(yīng)試劑為Gly或不需要終止；采用Superdex 75分子篩層析法從反應(yīng)產(chǎn)物中分離純化Urica

3、se-PEG，純化的Uricase-PEG樣品經(jīng)SDS-PAGE分析，主要修飾組分Uricase-PEG(一分子Uricase結(jié)合一分子PEG，占修飾蛋白的80％以上)的相對(duì)分子質(zhì)量為10,0000左右；用TNBS(三硝基苯磺酸)法分析Uficase修飾前后的氨基含量，結(jié)果表明修飾率為30％左右；Uricase-PEG催化尿酸分解的最適pH為8.5，與非修飾Uricase前的最適pH相等，二者的pH穩(wěn)定范圍未發(fā)生改變；最適溫度為45℃，