CUEDC2在糖尿病腎病EMT發(fā)生中的作用及機制研究.pdf

1、糖尿病腎病(Diabetic nephropathy, DN)是糖尿病最常見且最難治的微血管并發(fā)癥。腎小球硬化，腎小球系膜細胞外基質(zhì)(Extra cellular matrix，ECM)的沉積和腎小管間質(zhì)中的纖維化是糖尿病腎病的主要病理特征，其中腎小管間質(zhì)性纖維化（Tubular interstitial fibrosis，TIF）是包括糖尿病腎病在內(nèi)的多種慢性腎臟疾病進展為終末期腎病的主要病理基礎(chǔ)。腎小管上皮細胞EMT(Epithel

2、ial-Mesenchymal Transition，EMT)對腎間質(zhì)纖維化起到關(guān)鍵性作用，被認為是腎間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié)之一。雖然腎小管上皮細胞EMT在腎臟纖維化中的作用已經(jīng)被充分認識到，但是它們在糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展過程中的精確調(diào)節(jié)分子機制仍需要進一步闡明。轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growthfactorβ1，TGF-β1)被認為是DN中的關(guān)鍵性介質(zhì)，能直接誘導腎小管上皮細胞EMT。TGF-β1可上調(diào)ECM

3、蛋白的表達，同時增強ECM降解酶抑制劑如纖溶酶原激活物抑制劑1型(PAI-1)的表達。同時，TGF-β1/Smads信號傳導通路被認為是介導腎臟纖維化最重要、最經(jīng)典的途徑。
　　CUEDC2(CUE domain containging protein2，CUEDC2)是一種新發(fā)現(xiàn)的含有CUE結(jié)構(gòu)域的多功能蛋白，在多種腫瘤中表達量上升，并在諸如細胞周期，炎癥和腫瘤發(fā)生等許多生物過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。CUE結(jié)構(gòu)域含有一個約40個氨基酸

4、的大小的泛素結(jié)合序列，能夠識別單泛素和多泛素，并促進分子間單泛素化。CUEDC2能與孕激素受體(PR)相互結(jié)合，促進孕酮誘導的孕激素受體泛素化降解。此外，據(jù)報道，CUEDC2可以通過募集蛋白磷酸酶1(PP1)到IKK/CUEDC2復合物，并通過招募PP1對IkB激酶α(IKKα)和IkB激酶β(IKKβ)去磷酸化作用，從而抑制IKKα和IKKβ磷酸化，最終下調(diào)NF-κB通路。然而，CUEDC2在DN發(fā)生發(fā)展中的作用及機制尚未闡明。

5、>　　本課題組從以下兩個方面開展研究工作以揭示CUEDC2在糖尿病腎病EMT發(fā)生中的作用及機制:
　　(一)CUEDC2對DN腎臟生化功能及腎間質(zhì)纖維化的作用
　　為了探究CUEDC2對DN腎間質(zhì)纖維化及腎臟生化功能的作用，我們首先在臨床DN和db/db小鼠自發(fā)性糖尿病腎病模型中檢測CUEDC2在腎臟中的表達及定位;而后在自發(fā)性糖尿病腎病db/db小鼠模型中，探討干預CUEDC2蛋白的表達對腎臟生化功能及腎間質(zhì)纖維化的影響;

6、我們得到以下結(jié)果:
　　1.CUEDC2主要表達于腎小管細胞胞漿中，在糖尿病腎病腎臟組織中的表達特異性下調(diào);
　　2.在活體糖尿病腎病小鼠體內(nèi)，采用超聲微泡聯(lián)合穿膜肽轉(zhuǎn)染過表達CUEDC2的表達，可以降低db/db小鼠的體重、血糖、總膽固醇和尿白蛋白的排泄，減輕腎間質(zhì)纖維化。
　?。ǘ〤UEDC2在DN腎臟腎小管上皮細胞EMT中的作用及可能機制
　　為了探究CUEDC2在DN腎臟腎小管上皮細胞EMT中的作用及可

7、能機制，我們在體外培養(yǎng)腎小管上皮細胞(HK2)，在離體細胞水平檢測干預CUEDC2蛋白的表達對糖尿病腎病EMT的作用并探討相關(guān)機制;我們得到以下結(jié)果:
　　1.TGF-β1刺激條件下，在HK2中過表達CUEDC2，能下調(diào)P-Smad2和P-Smad3表達并且能下調(diào)間充質(zhì)表型蛋白:Fibronectin和vimentin的表達，而上調(diào)E-cadherin的表達，相反干涉CUEDC2的表達，結(jié)果相反。充分表明過表達/抑制CUEDC2能