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文檔簡介
1、目的:探討TG2抑制劑在減輕大鼠肺動脈高壓肺血管重構(gòu)中的作用機制。
方法:
1、采用左肺切除加野百合堿注射建立大鼠肺動脈高壓模型,利用TG2抑制劑─胱胺二鹽酸,抑制肺動脈高壓肺血管重構(gòu)。
2、將30只健康雄性SD大鼠隨機分為3組(每組10只),即空白對照組:不做任何處理,同其他兩組大鼠相同環(huán)境下飼養(yǎng);模型組:左肺切除術(shù)7d后野百合堿(MCT,60mg/kg)項背部皮下注射;干預組:在模型組基礎上,于左肺切除
2、術(shù)5d后,每日腹腔注射胱胺二鹽酸(112mg/kg)持續(xù)至實驗35d。
3、各組大鼠在實驗35d后,測定平均肺動脈壓力(mPAP),計算右心肥厚指數(shù)(RVHI),即右心室游離壁(RV)與左心室+室間隔(LV+S)之比,即RV/(LV+S)。
4、將各組大鼠肺組織做HE染色、肺彈力纖維染色,觀察肺血管及肺組織的病理改變,計算肺小動脈中膜厚度百分比(WT%)、肺小動脈管壁面積與血管總面積比值(WA%)、肺小動脈新生內(nèi)膜增
3、殖度等指標。
5、采用RT-PCR測定各組大鼠肺組織中Akt mRNA相對表達水平。
6、采用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)測定各組大鼠Akt和p-Akt蛋白表達水平。
結(jié)果:
1、與對照組比較,采用左肺切除加野百合堿注射的模型組大鼠形成了嚴重的肺動脈高壓及右心室肥大,并有新生內(nèi)膜形成,mPAP、右心肥厚指數(shù)百分比(RVHI%)、肺小動脈中膜厚度百分比(WT%)、肺小動脈管壁面積與血
4、管總面積比值(WA%)及新生內(nèi)膜增殖度百分比均明顯高于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
2、采用胱胺二鹽酸干預后,干預組mPAP、右心肥厚指數(shù)百分比(RVHI%)、肺小動脈中膜厚度百分比(WT%)、肺小動脈管壁面積與血管總面積比值(WA%)及新生內(nèi)膜增殖度百分比較模型組均有不同程度的降低,差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
3、RT-PCR結(jié)果顯示模型組Akt mRNA的表達水平較對照組有增高,差異有統(tǒng)
5、計學意義(p<0.05),Western blot結(jié)果顯示模型組肺組織Akt和p-Akt蛋白表達水平較對照組亦有增高,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。采用胱胺二鹽酸干預后,干預組Akt mRNA的表達水平、Akt和p-Akt蛋白表達量較模型組均有不同程度的下降,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
結(jié)論:
1、左肺切除+野百合堿注射成功建立大鼠肺動脈高壓模型,并形成了新生內(nèi)膜及典型病理學特征─肺血管重構(gòu)。
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