血管性癡呆大鼠海馬中腦源性營(yíng)養(yǎng)因子各亞型的變化與認(rèn)知關(guān)系.pdf

1、研究背景：
　　隨著平均壽命的增加，血管性癡呆（VD）的發(fā)病率也逐漸增加,并引起醫(yī)學(xué)領(lǐng)域及社會(huì)的關(guān)注。目前尚沒有針對(duì)VD的藥物且其發(fā)病機(jī)制商不清楚，故有關(guān)VD的研究也成為了目前的研究熱點(diǎn)。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）是一種神經(jīng)生長(zhǎng)因子，廣泛存在于哺乳動(dòng)物腦內(nèi)，與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)。BDNF最初是以蛋白前體（pro-BDNF）的形式合成，隨后裂解為截短型BDNF和成熟型BDNF（mBDNF）。研究發(fā)現(xiàn)腦缺血后腦組織內(nèi)存在著BDNF表

2、達(dá)的變化。近期研究發(fā)現(xiàn)三種形式的BDNF均與認(rèn)知功能有關(guān)。但目前對(duì)BDNF的研究主要在mBDNF，這三種蛋白在VD中的變化尚不清楚。故本研究擬通過(guò)細(xì)胞和動(dòng)物模型，探討三種BDFN蛋白，pro-BDNF、截短型BDNF和mBDNF，在VD中的變化.
　　第一部分糖氧剝奪后海馬神經(jīng)元中腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子各亞型的變化
　　目的：
　　觀察對(duì)體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元建立糖氧剝奪損傷模型后pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF的

3、變化，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF在血管性癡呆中的變化。
　　方法：
　　提取新生大鼠大腦海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng),隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，培養(yǎng)7天后實(shí)驗(yàn)組糖氧剝奪（OGD）處理，實(shí)驗(yàn)組分為OGD處理30min、6h、12h、24h4個(gè)時(shí)間點(diǎn)。MTT檢測(cè)OGD處理后細(xì)胞活性。Westernblot方法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)海馬神經(jīng)元中pro-BDNF、mBDNF、截短型BDNF變化。
　　結(jié)果：

4、>　　1.經(jīng)OGD處理后海馬神經(jīng)元細(xì)胞活性降低（P＜0.05），且隨OGD處理時(shí)間延長(zhǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞活性降低越明顯（P＜0.05）。
　　2.與對(duì)照組相比：mBDNF在OGD處理30min時(shí)間點(diǎn)有短暫的升高，隨后持續(xù)降低（F=10.496，P=0.000）；截短型BDNF蛋白含量持續(xù)降低（F=31.641，P=0.000），pro-BDNF在OGD處理后蛋白含量先升高后降低，30min、6h蛋白含量逐漸升高，12h時(shí)較6h減少但仍

5、高于對(duì)照組，OGD處理24h蛋白量開始低于對(duì)照組（F=16.246，P=0.000）。
　　結(jié)論：
　　1．神經(jīng)元缺血缺氧損傷后細(xì)胞活性降低，損傷持續(xù)時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞活性降低越明顯。
　　2．海馬神經(jīng)元在缺血缺氧性損傷后pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF含量均發(fā)生改變，三者比例明顯發(fā)生改變。
　　第二部分血管性癡呆大鼠海馬中腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子各亞型的變化
　　目的：
　　探討血管性癡呆（VD）

6、大鼠海馬中腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子前體蛋白（pro-BDNF）、成熟BDNF（mBDNF）、截短型BDNF變化與認(rèn)知功能關(guān)系。
　　方法：
　　健康雄性SD大鼠120只，6月齡，體重350g左右，隨機(jī)分為模型組和假手術(shù)組，模型組結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈，假手術(shù)組的處理除不結(jié)扎血管外余同模型組，模型組和假手術(shù)組大鼠隨機(jī)分為2周、4周、8周、12周4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，水迷宮實(shí)驗(yàn)篩選造模成功大鼠，對(duì)假手術(shù)組大鼠及造模成功的大鼠進(jìn)行免疫組化和wester

7、n印記方法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)海馬中pro-BDNF、mBDNF、截短型BDNF變化。
　　結(jié)果：
　　1.VD模型建立結(jié)果：建立模型組大鼠65只，死亡16只；建立假手術(shù)組大鼠55只，死亡4只。
　　2.各組大鼠行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果：與假手術(shù)組相比，模型組大鼠潛伏期明顯延長(zhǎng)，差異明顯（P＜0.05），表明模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力受損，出現(xiàn)一定的認(rèn)知功能障礙。模型組內(nèi)單因素方差分析示：F=14.63，P=0.000，表明隨缺血時(shí)間延長(zhǎng)

8、，認(rèn)知功能障礙逐漸加重。
　　3.免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果：與免疫組化檢測(cè)示模型組海馬區(qū)神經(jīng)元胞體變大、輪廓清晰度減退、神經(jīng)元數(shù)量減少，隨缺血時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞陽(yáng)性率降低越明顯。
　　4.Westernblot結(jié)果：組間比較：模型組pro-BDNF在缺血早期減少不明顯，缺血晚期明顯低于假手術(shù)組（P＜0.05）；截短型BDNF在缺血早期就開始減少（P＜0.05）；mBDNF在缺血晚期明顯減少（P＜0.05），早期減少不明顯。假手術(shù)組組內(nèi)

9、差異不明顯（P＞0.05）。模型組組內(nèi)分析發(fā)現(xiàn)：模型組pro-BDNF的下降趨勢(shì)較緩（相鄰時(shí)間點(diǎn)間差異P＞0.05）；截短型BDNF的下降趨勢(shì)在2周和4周間最明顯（P＜0.05）；mBDNF的下降趨勢(shì)在8周后較明顯（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．在慢性缺血VD大鼠海馬區(qū)BDNF的表達(dá)及表達(dá)后加工會(huì)出現(xiàn)異常。
　　2．pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF比例的改變可能與VD大鼠認(rèn)知功能減退有關(guān)：在VD大鼠