血管性癡呆大鼠海馬中腦源性營養(yǎng)因子各亞型的變化與認知關系.pdf

1、研究背景：
　　隨著平均壽命的增加，血管性癡呆（VD）的發(fā)病率也逐漸增加,并引起醫(yī)學領域及社會的關注。目前尚沒有針對VD的藥物且其發(fā)病機制商不清楚，故有關VD的研究也成為了目前的研究熱點。腦源性神經營養(yǎng)因子（BDNF）是一種神經生長因子，廣泛存在于哺乳動物腦內，與學習記憶密切相關。BDNF最初是以蛋白前體（pro-BDNF）的形式合成，隨后裂解為截短型BDNF和成熟型BDNF（mBDNF）。研究發(fā)現腦缺血后腦組織內存在著BDNF表

2、達的變化。近期研究發(fā)現三種形式的BDNF均與認知功能有關。但目前對BDNF的研究主要在mBDNF，這三種蛋白在VD中的變化尚不清楚。故本研究擬通過細胞和動物模型，探討三種BDFN蛋白，pro-BDNF、截短型BDNF和mBDNF，在VD中的變化.
　　第一部分糖氧剝奪后海馬神經元中腦源性神經營養(yǎng)因子各亞型的變化
　　目的：
　　觀察對體外培養(yǎng)海馬神經元建立糖氧剝奪損傷模型后pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF的

3、變化，通過體外實驗探討pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF在血管性癡呆中的變化。
　　方法：
　　提取新生大鼠大腦海馬神經元體外培養(yǎng),隨機分為對照組和實驗組，培養(yǎng)7天后實驗組糖氧剝奪（OGD）處理，實驗組分為OGD處理30min、6h、12h、24h4個時間點。MTT檢測OGD處理后細胞活性。Westernblot方法測定不同時間點海馬神經元中pro-BDNF、mBDNF、截短型BDNF變化。
　　結果：

4、>　　1.經OGD處理后海馬神經元細胞活性降低（P＜0.05），且隨OGD處理時間延長海馬神經元細胞活性降低越明顯（P＜0.05）。
　　2.與對照組相比：mBDNF在OGD處理30min時間點有短暫的升高，隨后持續(xù)降低（F=10.496，P=0.000）；截短型BDNF蛋白含量持續(xù)降低（F=31.641，P=0.000），pro-BDNF在OGD處理后蛋白含量先升高后降低，30min、6h蛋白含量逐漸升高，12h時較6h減少但仍

5、高于對照組，OGD處理24h蛋白量開始低于對照組（F=16.246，P=0.000）。
　　結論：
　　1．神經元缺血缺氧損傷后細胞活性降低，損傷持續(xù)時間越長，細胞活性降低越明顯。
　　2．海馬神經元在缺血缺氧性損傷后pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF含量均發(fā)生改變，三者比例明顯發(fā)生改變。
　　第二部分血管性癡呆大鼠海馬中腦源性神經營養(yǎng)因子各亞型的變化
　　目的：
　　探討血管性癡呆（VD）

6、大鼠海馬中腦源性神經營養(yǎng)因子前體蛋白（pro-BDNF）、成熟BDNF（mBDNF）、截短型BDNF變化與認知功能關系。
　　方法：
　　健康雄性SD大鼠120只，6月齡，體重350g左右，隨機分為模型組和假手術組，模型組結扎雙側頸總動脈，假手術組的處理除不結扎血管外余同模型組，模型組和假手術組大鼠隨機分為2周、4周、8周、12周4個時間點，水迷宮實驗篩選造模成功大鼠，對假手術組大鼠及造模成功的大鼠進行免疫組化和wester

7、n印記方法檢測不同時間點海馬中pro-BDNF、mBDNF、截短型BDNF變化。
　　結果：
　　1.VD模型建立結果：建立模型組大鼠65只，死亡16只；建立假手術組大鼠55只，死亡4只。
　　2.各組大鼠行為學檢測結果：與假手術組相比，模型組大鼠潛伏期明顯延長，差異明顯（P＜0.05），表明模型組大鼠學習記憶能力受損，出現一定的認知功能障礙。模型組內單因素方差分析示：F=14.63，P=0.000，表明隨缺血時間延長

8、，認知功能障礙逐漸加重。
　　3.免疫組織化學檢測結果：與免疫組化檢測示模型組海馬區(qū)神經元胞體變大、輪廓清晰度減退、神經元數量減少，隨缺血時間延長細胞陽性率降低越明顯。
　　4.Westernblot結果：組間比較：模型組pro-BDNF在缺血早期減少不明顯，缺血晚期明顯低于假手術組（P＜0.05）；截短型BDNF在缺血早期就開始減少（P＜0.05）；mBDNF在缺血晚期明顯減少（P＜0.05），早期減少不明顯。假手術組組內

9、差異不明顯（P＞0.05）。模型組組內分析發(fā)現：模型組pro-BDNF的下降趨勢較緩（相鄰時間點間差異P＞0.05）；截短型BDNF的下降趨勢在2周和4周間最明顯（P＜0.05）；mBDNF的下降趨勢在8周后較明顯（P＜0.05）。
　　結論：
　　1．在慢性缺血VD大鼠海馬區(qū)BDNF的表達及表達后加工會出現異常。
　　2．pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF比例的改變可能與VD大鼠認知功能減退有關：在VD大鼠