AG490對甲狀腺髓樣癌TT細(xì)胞放射敏感性的研究.pdf

1、目的:
　　甲狀腺髓樣癌（medullary thyroid carcinoma,MTC）是起源于甲狀腺濾泡旁分泌細(xì)胞的惡性腫瘤。甲狀腺濾泡旁分泌細(xì)胞不能吸收碘，而且對射線不敏感，因此放射治療在該疾病治療中起著極微療效。本文通過對AG490干預(yù)下，甲狀腺髓樣癌TT細(xì)胞體外培養(yǎng)的情況進(jìn)行研究，探討AG490在阻斷JAK-STAT信號通路及增加放射敏感性中的作用，為臨床上更有效的治療甲狀腺髓樣癌提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法:<

2、br>　　1.MTT法檢測甲狀腺髓樣癌TT細(xì)胞在遞增濃度：0、25、50、100μmol/L AG490干預(yù)下第1、2、3、4、5d不同時間點的吸光度值，以判斷細(xì)胞增殖情況。
　　2.流式細(xì)胞檢測技術(shù)檢測甲狀腺髓樣癌TT細(xì)胞在遞增濃度0、25、50、100μmol/L AG490干預(yù)48h后細(xì)胞的凋亡情況。
　　3.Western blot法檢測甲狀腺髓樣癌TT細(xì)胞在不同濃度AG490干預(yù)24h后，JAK2、p-STAT3、

3、Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)情況。
　　4.以50μmol/L濃度 AG490的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)甲狀腺髓樣癌TT細(xì)胞作為實驗組，以不含AG490的普通培養(yǎng)基作為對照組對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁后，采用0、2、4、6、8、10Gy的遞增單吸收劑量進(jìn)行照射，24h后顯微鏡下計數(shù)，計算克隆接種率(planting efficiency,PE)、存活分?jǐn)?shù)(survival fraction,SF)，并采用GraphPad Prism5軟件擬合

4、細(xì)胞存活曲線。根據(jù)細(xì)胞存活曲線計算相關(guān)放射生物學(xué)參數(shù)射線為2Gy時的存活分?jǐn)?shù)（SF2）、平均致死劑量（D0）、準(zhǔn)閾劑量（Dq）、外推數(shù)（N）、D0時放射增敏比（SER D0）和Dq時放射增敏比（SERDq）等參數(shù)。
　　5.對甲狀腺髓樣癌TT細(xì)胞采取0、25、50、100μmol/L的AG490進(jìn)行干預(yù)，并采取4Gy劑量進(jìn)行照射，通過western blot實驗和Quantity one軟件測定每組細(xì)胞JAK2和p-Stat3含量

5、。
　　結(jié)果:
　　增殖率檢測：與0μmol/L相比，25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L組均可見TT細(xì)胞受到一定程度的抑制，隨著濃度的增加、時間的延長，AG490對甲狀腺髓樣癌TT細(xì)胞的抑制作用逐漸增大。凋亡率檢測顯示：0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L濃度組細(xì)胞凋亡率分別為4.86±0.79％、15.24±1.00%、33.11±2.40%、64.47±2.29%。凋

6、亡率隨著AG490藥物濃度的增加而逐漸增加。蛋白含量檢測：與0μmol/L比較，JAK2、p-Stat3和Bcl-2蛋白表達(dá)量隨著濃度的增高逐漸降低，Bax表達(dá)增高。經(jīng)Poisson關(guān)聯(lián)性分析JAK2和p-Stat3呈正相關(guān)，r=0.67；JAK2和Bcl-2呈正相關(guān)，r=0.79；p-Stat3和Bcl-2呈正相關(guān)，r=0.70；JAK2、p-Stat3、Bcl-2和Bax均呈負(fù)相關(guān)，r=-0.44、-0.42、-0.40。
　

7、　放射敏感性實驗結(jié)果顯示：對照組和實驗組細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)(survival fraction,SF)均隨著照射劑量的增加而降低，且藥物組降低較前者更顯著。6種放射生物學(xué)參數(shù)之間比較,實驗組較對照組差別有統(tǒng)計學(xué)意義。在給予4Gy劑量照射后，0、25、50和100μmol/L濃度組JAK2分別為0.94±0.09、0.78±0.02、0.31±0.01、0.15±0.03，p-Stat3分別為0.94±0.83、0.85±0.0.13、0.43

8、±0.03、0.23±0.02。與未照射組相比，兩種蛋白表達(dá)均下降，且當(dāng)AG490濃度≥50μmol/L時差異具有顯著性P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　隨著AG490濃度的增加、作用時間的延長，對體外培養(yǎng)的甲狀腺髓樣癌TT細(xì)胞抑制作用逐漸增加，細(xì)胞凋亡率逐漸增加，進(jìn)一步說明細(xì)胞增殖受到抑制。在給予單劑量照射后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生存率隨劑量增加逐漸降低，含藥組更明顯，且放射生物學(xué)參數(shù)也相應(yīng)變化。蛋白檢測表明JAK2、p-Stat3、B