小球藻的自養(yǎng)培養(yǎng)及其產(chǎn)物中多不飽和脂肪酸的研究.pdf

1、多不飽和脂肪酸(PUFAs)在營(yíng)養(yǎng)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著重要作用。目前PUFAs主要從魚(yú)油中提取，工藝復(fù)雜，價(jià)格昂貴。小球藻中含有豐富的多不飽和脂肪酸，因此利用微藻，尤其是自養(yǎng)小球藻，可以吸收CO2轉(zhuǎn)化生產(chǎn)多不飽和脂肪酸具有廣闊的前景。
　　本文采用中國(guó)淡水藻種庫(kù)的三株小球藻(藻株1068、270、40)和實(shí)驗(yàn)室自行篩選的三株小球藻（藻株WLZ-8、14、24），通過(guò)設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)（ρNa2CO3、初始pH值、N/P）對(duì)培養(yǎng)條件

2、進(jìn)行優(yōu)選;培養(yǎng)過(guò)程中以碳酸鈉為碳源，硝酸鈉為氮源，磷酸二氫鉀為磷源。通過(guò)設(shè)計(jì)單因素實(shí)驗(yàn)（接種量、溫度、光照強(qiáng)度、鹽度）對(duì)影響小球藻自養(yǎng)培養(yǎng)的環(huán)境因素進(jìn)行探索。實(shí)驗(yàn)中以小球藻的生物量、生長(zhǎng)速率、世代時(shí)間、細(xì)胞密度為指標(biāo)，確定最佳培養(yǎng)條件。在優(yōu)化培養(yǎng)條件下，六株小球藻的12天生物量分別為0.425、0.388、0.275、0.298、0.327、0.303g/L。
　　本文利用乙醚-石油醚法對(duì)小球藻產(chǎn)物中的多不飽和脂肪酸進(jìn)行提取，采用

3、酸堿結(jié)合甲酯化法對(duì)多不飽和脂肪酸進(jìn)行預(yù)處理。為提高測(cè)定樣品預(yù)處理的效率，本文通過(guò)設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)（ρKOH-甲醇、皂化時(shí)間、ρH2SO4-甲、酯化時(shí)間）和單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)預(yù)處理?xiàng)l件進(jìn)行優(yōu)選。最終確定樣品預(yù)處理的最優(yōu)條件是ρKOH-甲醇為0.5mol/L，皂化時(shí)間為l0min，ρH2SO4-甲醇為5％，酯化時(shí)間為8min。測(cè)定過(guò)程中的RSD為0.7％-3.1％，六株小球藻粉經(jīng)乙醚-石油醚提取以及甲酯化過(guò)程的加標(biāo)回收率55.5％-82.

4、7％。
　　本文建立了多不飽和脂肪酸的GC/MS的定性定量測(cè)定方法。經(jīng)GC/MS對(duì)樣品進(jìn)行初步分析確定藻粉中主要產(chǎn)物為C16H30O2、 C18H36O2、 C18H32O2和C18H30O2。其出峰時(shí)間依次分別為15'95、20'24、20'45和21'00。
　　通過(guò)加標(biāo)回收率折算，六株小球藻粉種PUFAs的實(shí)際產(chǎn)量分別為10.66mg/g藻粉、20.52mg/g藻粉、10.72mg/g藻粉、11.64mg/g藻粉、26