A型肉毒素重鏈對(duì)大鼠脊髓損傷后總體蛋白表達(dá)、髓鞘相關(guān)糖蛋白及其受體表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　1.在大鼠腰段脊髓損傷模型基礎(chǔ)上局部給予小劑量A型肉毒桿菌神經(jīng)毒素重鏈(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,BoNT/AHC)，觀察其對(duì)脊髓損傷后局部總體蛋白表達(dá)譜的影響；
　　2.觀察BoNT/AHC對(duì)脊髓損傷局部髓磷脂相關(guān)糖蛋白及其受體表達(dá)的影響，為探討B(tài)oNT/A重鏈促進(jìn)神經(jīng)突起再生的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用1ml注射器針頭

2、改制的脊髓損傷器械復(fù)制大鼠腰段脊髓半離斷性損傷模型；在模型復(fù)制同時(shí)由針頭所連接微量注射器向髓腔內(nèi)注射不同劑量BoNT/A重鏈(2μg、4μg、6μg和8μg)；
　　2.于大鼠脊髓損傷后2天和20天提取損傷局部及損傷近端2~3cm組織蛋白進(jìn)行SDS-PAGE+考馬氏亮藍(lán)染色確定蛋白表達(dá)有無差異，同時(shí)采用BoNT/A重鏈6?g劑量組進(jìn)行雙向電泳+硝酸銀染色進(jìn)一步確定蛋白表達(dá)差異的點(diǎn)數(shù)或點(diǎn)群分布；
　　3.根據(jù)雙向電泳所出現(xiàn)的點(diǎn)

3、群變化的分子量水平，采用western blot主要檢測(cè)BoNT/A重鏈對(duì)脊髓組織髓磷脂相關(guān)抑制因子—髓鞘相關(guān)糖蛋白（myelin associated glycoprotein,MAG）及其受體(nogo-receptor,NgR)的表達(dá)的干預(yù)作用。
　　結(jié)果:
　　1.單側(cè)腰段脊髓損傷模型顯微鏡下呈現(xiàn)明顯的一側(cè)脊髓結(jié)構(gòu)破壞，局部神經(jīng)細(xì)胞壞死、白質(zhì)神經(jīng)傳導(dǎo)束崩解不可辨認(rèn)；
　　2.SDS-PAGE+考馬斯亮藍(lán)染色顯示

4、，單純脊髓損傷后，損傷局部蛋白表達(dá)與正常相比有明顯不同，有些分子量水平的蛋白表達(dá)明顯增多；BoNT/A重鏈用藥后2天及20天時(shí)，局部蛋白的表達(dá)與單純損傷組相比明顯不同，但與正常對(duì)照組類同、趨向正?；?；
　　3.雙向電泳+硝酸銀染色的結(jié)果進(jìn)一步確定了這些蛋白表達(dá)變異的現(xiàn)象出現(xiàn)在多個(gè)分子量水平，呈現(xiàn)點(diǎn)或點(diǎn)群的表達(dá)變異。有10余種蛋白表達(dá)與單純損傷組明顯不同,呈向正常轉(zhuǎn)化的趨勢(shì)；主要的特點(diǎn)是：單純損傷時(shí)，某些蛋白點(diǎn)或點(diǎn)群表達(dá)增加，而Bo

5、NT/A重鏈干預(yù)后，這些變異又趨向于與正常對(duì)照組相似；
　　4.根據(jù)蛋白表達(dá)變異的分子量特點(diǎn)，選取MAG和NgR作為目標(biāo)蛋白的wesetrb-blot結(jié)果顯示：單純脊髓損傷后MAG及NgR表達(dá)皆呈現(xiàn)增多，而髓腔內(nèi)注射BoNT/A重鏈后這兩種蛋白的表達(dá)均減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.BoNT/A重鏈可干預(yù)大鼠脊髓損傷后局部蛋白表達(dá)譜變化；
　　2.BoNT/A重鏈可逆轉(zhuǎn)脊髓損傷后局