條件性RNAi敲低技術(shù)降低FGFR2的表達(dá)對小鼠軟骨發(fā)育的影響.pdf

1、基因敲除技術(shù)是研究基因功能的一種重要手段?；蚯贸夹g(shù)是80年代末以來發(fā)展起來的一種新型分子生物學(xué)技術(shù)，是通過一定的途徑使機(jī)體特定的基因失活或缺失的技術(shù)。通常意義上的基因敲除主要是用DNA同源重組原理，用設(shè)計的基因片段代替靶基因片段，從而達(dá)到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術(shù)的發(fā)展，除了同源重組外，新的原理和技術(shù)也逐漸在被應(yīng)用，如誘導(dǎo)性基因敲除技術(shù)、條件性基因敲除技術(shù)、利用隨機(jī)插入片段進(jìn)行基因敲除技術(shù)、反義核酸技術(shù)。 近年來，一

2、些新技術(shù)也用于研究基因功能，RNA干擾就是其中的一種。RNAi技術(shù)是使基因表達(dá)降低，通過比較前后基因型的變化，能很方便的鑒定出基因的功能。本實驗是用條件性RNAi基因敲低技術(shù)來研究小鼠軟骨細(xì)胞中FGFR2對小鼠軟骨發(fā)育的作用。 首先，鑒定出條件性RNAi敲低FGFR2小鼠FGFR2-RNAi和在軟骨細(xì)胞特異表達(dá)Cre重組蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠Coll2a-Cre，然后讓FGFR2-RNAi小鼠和在軟骨細(xì)胞特異表達(dá)Cre重組蛋白的轉(zhuǎn)基

3、因小鼠Coll2a-Cre交配，經(jīng)過對后代小鼠的基因型鑒定，得到雙轉(zhuǎn)基因小鼠FGFR2RNAi；Coll2a-Cre，觀察了雌性雙轉(zhuǎn)基因小鼠FGFR2RNAi；Coll2a-Cre和同窩雌性對照體重和時間的關(guān)系以及雄性雙轉(zhuǎn)基因小鼠FGFR2RNAi；Coll2a-Cre和同窩雄性對照體重和時間的關(guān)系，經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)雙轉(zhuǎn)基因小鼠FGFR2RNAi；Coll2a-Cre要比同窩對照小鼠的體重要輕；并進(jìn)一步分別觀察了雌、雄性雙轉(zhuǎn)基因小鼠