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文檔簡(jiǎn)介
1、腫瘤壞死因子(human tumor necrosis factor,hTNF)是由激活的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種多功能細(xì)胞因子,其最顯著的活性特征是可以在體內(nèi)或體外特異性的殺傷多種腫瘤細(xì)胞.是一種有潛在應(yīng)用價(jià)值的抗腫瘤、抗病毒感染以及免疫調(diào)節(jié)生物制劑.TNF的臨床研究曾在許多國(guó)家展開(kāi),但因其全身用藥毒副作用太大而限制了其臨床應(yīng)用.但利用提高腫瘤組織TNF-α濃度的技術(shù)和應(yīng)用基因工程手段制備高效低毒TNF-α突變體呈現(xiàn)出較好的應(yīng)用前景.我們?nèi)?/p>
2、工合成了編碼GFE-1的寡核苷酸片斷,與rmhTNF基因連接后,克隆入pGEM3zf(-)質(zhì)粒,序列分析表明,合成片斷成功的插入rmhTNF的氨基端.將融合基因克隆入PBV220表達(dá)載體中,在大腸桿菌中得到高效表達(dá),表達(dá)量占菌體總蛋白量的30﹪.以部分可溶形式存在,將裂菌上清經(jīng)過(guò)硫酸銨分段鹽析后,Q-Sepharose FF陰離子交換柱層析和SP-Sepharose FF 陽(yáng)離子交換柱層析,可獲取純度>87﹪的蛋白,蛋白回收率為2.58
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