葛根素對(duì)經(jīng)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠頸椎間盤纖維素環(huán)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的與意義:近年來(lái)，頸椎病的發(fā)病率不斷上升，且發(fā)病年齡呈現(xiàn)低齡化趨勢(shì)，對(duì)患者的生理心理造成多方面的影響，嚴(yán)重影響患者正常的工作和生活。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究葛根素對(duì)經(jīng)炎性因子IL-1β誘導(dǎo)的大鼠頸椎間盤纖維環(huán)凋亡細(xì)胞中凋亡調(diào)節(jié)因子Bcl-2與Caspase-3的影響，探索其延緩椎間盤退變、防治頸椎病的作用機(jī)制，并為臨床使用中藥葛根治療頸椎病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)與理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.體外分離培養(yǎng)大鼠頸椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞，穩(wěn)定

2、傳代。
　　 2.使用甲苯胺藍(lán)染色與免疫細(xì)胞化學(xué)染色法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　 3.WST-1及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度的IL-1β對(duì)大鼠頸椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞的影響，選取適宜的干預(yù)濃度。
　　 4.WST-1及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度葛根素對(duì)經(jīng)IL-1β誘導(dǎo)凋亡的大鼠頸椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞的影響。
　　 5.采用Western Blot法從蛋白水平檢測(cè)葛根素干預(yù)經(jīng)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠頸椎間盤纖維環(huán)凋亡細(xì)胞中Bcl-2

3、和Caspase-3的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.培養(yǎng)的第3代細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色呈異染性，Ⅰ型、Ⅱ型膠原免疫組化染色均可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，表明培養(yǎng)的第3代細(xì)胞具有椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞的表型特點(diǎn)，可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　 2.IL-1β各濃度組與Control組比較具有顯著性差異(P＜0.05)。不同時(shí)段，相同干預(yù)組之間比較差異明顯(P＜0.05)。隨著IL-1β劑量與干預(yù)時(shí)間的增加，凋亡作用愈加明顯，但當(dāng)干預(yù)時(shí)間增加

4、到一定程度時(shí)，IL-1β濃度的提高并沒(méi)有明顯呈現(xiàn)出加強(qiáng)凋亡效果的的作用。
　　 3.中高劑量的葛根素對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用明顯，均與IL-1β誘導(dǎo)凋亡組有顯著差異(P＜0.05)。
　　 4.Caspase-3蛋白表達(dá)水平隨著葛根素劑量的提高表達(dá)減弱;Bcl-2蛋白表達(dá)水平在Control組與單純IL-1β干預(yù)組較葛根素干預(yù)各組表達(dá)較低，具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.IL-1β能夠成