A-2巨球蛋白人工合成片段在創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎中作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分:A-2巨球蛋白變體有針對性的設(shè)計抑制分解蛋白酶在ACLT模型大鼠體內(nèi)的活體熒光分子斷層掃描的分析和研究
  目的:
  利用FMT(小動物活體熒光斷層成像技術(shù))初步觀察比較A-2巨球蛋白變體在ACLT模型大鼠的體內(nèi)對抑制分析蛋白酶的作用。及注射探針后發(fā)出熒光的淬滅時間,試圖找到一個在ACLT活體大鼠模型中最佳的掃描時間及ACLT術(shù)后,大鼠膝關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥變化的趨勢。
  方法:
  2月齡的Wista大鼠4

2、0只,20只Wista大鼠為模型對照組(Sham組)。將其右側(cè)關(guān)節(jié)囊打開暴露后縫合,并不對其進行ACLT術(shù)。20只Wista大鼠對其右側(cè)膝關(guān)節(jié)進行運用大鼠前交叉韌帶切斷(Anterior cruciate ligament transection,ACLT)ACLT組。然后對Sham及ACLT組右側(cè)關(guān)節(jié)腔注射探針(ProSense750 and MMPSense680),然后分別在2小時,12小時,24小時,48小時,72小時,96小時

3、,120小時,144小時,168小時,192小時,216小時,240小時,264小時。對其進行FMT掃描觀察。
  結(jié)果:
  在進行連續(xù)的FMT掃描后,發(fā)現(xiàn)在12小時到264小時時間段內(nèi),利用掃描區(qū)域的結(jié)果分析,在24小時的時候膝關(guān)節(jié)的探針摩爾濃度達到最高值。
  結(jié)論:
  在FMT對ACLT術(shù)后動物膝關(guān)節(jié)掃描研究中尚未有一個準確的掃描時間定論。通過實驗發(fā)現(xiàn)在24小時時間點。膝關(guān)節(jié)摩爾濃度達到最高值,確定了在

4、后續(xù)試驗中, FMT的掃描時間段。
  第二部分:在ACLT模型大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)補充外源性A-2巨球蛋白變體片段對關(guān)節(jié)軟骨的保護作用的研究
  目的:
  在ACLT術(shù)后大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射補充A-2巨球蛋白(Alpha-2-Macroglobulin,A2M)比較A2M全長及片段是否可以有效的阻止或明顯延緩創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎(Post-traumatic osteoarthritis,PTOA)的發(fā)生及發(fā)展。
  方法:<

5、br>  體外實驗,牛軟骨外植體(BCE)孵育與TNF-α和IL-1βα或不wt-A2m或A2M的變體。通過在培養(yǎng)上清液測定硫酸化糖胺聚糖(sGAG)軟骨代謝。運用前交叉韌帶離斷(Anterior cruciate ligament transection,ACLT)對Wista大鼠進行PTOA模型的的制備,將77只雄性Wista大鼠隨機分為7組,用不同劑量的A2M或它的變體注射關(guān)節(jié)腔治療在24小時和14天。
  1)ACLT+P

6、BS;
  2)ACLT+wt-A2m(0.153mg);
  3) ACLT+cyt-108 A2m(0.153mg);
  4)ACLT+cyt-108 A2m(0.077mg);
  5)ACLT+cyt-98 A2M(0.153mg);
  6) ACLT+cyt-98 A2M(0.077mg)7)Sham+鹽水術(shù)后8周收集關(guān)節(jié)及滑膜盥洗液。
  小動物活體熒光斷層成像技術(shù)(FMT)被用來在2

7、4小時后,用探針prosense(750)和mmpsense(680)體內(nèi)炎癥監(jiān)測術(shù)后2周,4周、6周。軟骨損傷定量用OARSI評分和MMP-3、13、ColX、Col2、Runx2和Aggrecan的免疫組化結(jié)果?;ゎ孪匆褐械腗MP-13通過ELISA對其水平進行檢測。PCR法評估軟骨組織中的各相關(guān)的基因表達水平。
  結(jié)果:
  在大鼠的PTOA模型當中,關(guān)節(jié)腔內(nèi)早期注射A2M及其變體能夠減緩PTOA的病理進程以及明顯

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