替諾福韋酯對神經(jīng)的損傷與機制研究.pdf

1、目的:應用替諾福韋酯溶液作用于體外培養(yǎng)的SH-SY5Y細胞、神經(jīng)元和鼠腦片神經(jīng)元，觀察不同濃度替諾福韋酯溶液對細胞存活率、凋亡及相關指標的影響。研究以不同類型的細胞為模型，初步探討替諾福韋酯對神經(jīng)的損傷和作用機制及替諾福韋酯長期應用與艾滋病腦病的關系。
　　方法:通過MTT比色法檢測替諾福韋酯對細胞存活率的影響；酶標法檢測替諾福韋酯對細胞培養(yǎng)液中LDH活性的影響；利用Hoechst-33342染色觀察替諾福韋酯對細胞形態(tài)上的變化特

2、征；應用原位末端轉移酶標記法（TUNEL）和Annexin V/PI標記染色流式細胞儀檢測替諾福韋損傷細胞的凋亡情況；細胞丙二醛（MDA）測試試劑盒測定細胞內(nèi)丙二醛（MDA）的量；DCFH-DA染色法檢測細胞內(nèi)活性氧（ROS）水平；TUNEL法檢測替諾福韋酯對腦片神經(jīng)細胞凋亡的影響；Caspase-3試劑盒檢測替諾福韋酯對細胞內(nèi)Caspase-3的活化程度的影響。
　　結果:MTT法和LDH法結果發(fā)現(xiàn)替諾福韋酯抑制SH-SY5Y細

3、胞和神經(jīng)元細胞的生長，隨著替諾福韋酯濃度的增加對細胞的抑制作用越明顯（P＜0.05），說明替諾福韋酯氧化損傷細胞。替諾福韋酯導致SH-SY5Y細胞和神經(jīng)元細胞的形態(tài)發(fā)生改變，具體變現(xiàn)為染色質凝聚，細胞核濃縮和邊緣化，出現(xiàn)凋亡小體等細胞凋亡的表現(xiàn)特征；TUNEL法和Annexin V/PI標記染色檢測顯示替諾福韋酯（10umol/L、20umol/L、40umol/L）處理72h細胞后，細胞的凋亡率與對照組相比明顯升高（P＜0.01）；細

4、胞的氧化和抗氧化之間的相關物質或酶發(fā)生變化，細胞內(nèi)ROS和MDA的量增加，Caspase-3活化也明顯升高（P＜0.01）。小鼠腦片神經(jīng)細胞經(jīng)10umol/L、20umol/L、40umol/L替諾福韋酯處理72h后出現(xiàn)大量神經(jīng)細胞凋亡，且呈濃度依賴性（P＜0.01）。
　　結論:
　　1.替諾福韋酯作用于SH-SY5Y細胞和神經(jīng)元細胞降低細胞的存活率，且使LDH水平升高，說明替諾福韋酯對神經(jīng)具有明顯毒性。
　　2.替