心力衰竭lncRNABC088254表達與LVEF、BNP的相關性研究.pdf

1、目的：
　　心力衰竭(heart failure，HF)或心功能不全，是指心臟的能量利用不足，收縮舒張障礙，排血量不能維持體內(nèi)代謝的需要，以致組織灌注量減少，體循環(huán)供血不足肺循環(huán)淤血，是心臟性病變的共同結(jié)局。當心肌舒縮功能減弱時，為了保證機體的代謝，維持心臟的排血量，機體開始出現(xiàn)代償機制，主要體現(xiàn)在Frank-Starling機制、心肌纖維增生肥厚、神經(jīng)體液因子的釋放等代償性變化。因此目前檢測心力衰竭發(fā)生主要依靠檢測代償機制的出現(xiàn)

2、，例如心臟射血分數(shù)、BNP、X線片等，但是檢測手段比較少，作用時間也比較短，近兩年發(fā)現(xiàn)IncRNA的作用不僅僅是基因的噪音，也可以編碼蛋白，分泌到血液中，很被證明是跟心力衰竭有關系，并且可以聯(lián)合進行治療心力衰竭，本文涉及的IncRNABC088254之前有研究指出是心肌細胞能量利用的關鍵RNA，基因表達高低可能與心肌損害的程度有關。探討更多更敏感的心力衰竭指標是目前臨床上治療心衰，提高生存率的迫切要求;關于心衰的發(fā)生機制也并沒有明確的闡

3、述，因此進一步探究心衰的發(fā)生發(fā)展機制、提高疾病的診斷和治療水平是迫切需要進行的。
　　方法：
　　1)取自山東省千佛山醫(yī)院6例擴張性心肌病導致的心力衰竭的心臟組織，4例心功能相對正常的換瓣手術得來的乳頭肌組織為對照組，針對于年齡、性別進行數(shù)據(jù)分析。年齡的分布分析采取獨立樣本T檢驗的方式進行分析;對于性別進行四個表的卡方檢驗即Chi-square test。分析的數(shù)據(jù)結(jié)果以P的值來表達，P＜0.05或者P＜0.01即為具有統(tǒng)計

4、學意義。
　　2)采用心肌組織檢測IncRNABC088254基因的表達水平證實IncBC088254在心力衰竭中的表達。在檢測IncRNABC088254的基因水平的同時針對于患者的左心室射血分數(shù)和BNP的值進行分析和數(shù)據(jù)處理，目的為了證明IncRNABC088254在心力衰竭疾病中的表達，同左心室射血分數(shù)和BNP的值類似，并且對于這三者之間的關系進行相關性研究。數(shù)據(jù)的分析處理采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件進行分析，數(shù)據(jù)分布以均

5、值為中心的正態(tài)分布，數(shù)據(jù)計量資料應用t檢驗或單因素方差分析，采用Fisher確切概率計算法，P＜0.05被認為數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計學意義，P＜0.01被認為數(shù)據(jù)具有顯著統(tǒng)計學意義。
　　3)IncRNABC088254體外研究部分，通過同源轉(zhuǎn)錄本查找到大鼠的IncRNABC088254的序列，建立體外心肌細胞肥大模型，用血管緊張素Ⅱ刺激心肌細胞肥大，檢測肥大心肌細胞中IncRNABC088254相對于未加刺激細胞的表達水平;用Smart

6、Silencer（一種siRNA，特異性RNA干擾劑）干擾IncRNABC088254的表達，用RT-PCR檢測IncRNABC088254和其相關基因phb2的表達水平;同時培養(yǎng)心肌細胞干擾IncRNABC088254后提取蛋白，用蛋白凝膠電泳檢測phb2蛋白表達水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1.針對患者的年齡、性別因素進行分析，分析結(jié)果證明年齡的分布采用均值±標準差來進行描述，差異為P＞0.05,可認為差異沒有統(tǒng)計學意義

7、;性別的分析用四格表的卡方檢驗來進行，最后結(jié)果表明，差異P＞0.05即可以認為差異沒有意義。經(jīng)過對兩者的統(tǒng)計分析我們可以認為年齡、性別的差別不能構(gòu)成對實驗結(jié)果的影響。
　　2.病人心肌組織提取RNA，RT-PCR顯示IncRNABC088254在因心臟功能差需要換心手術的病人心室組織基因水平相對于心臟功能正常的瓣膜置換術乳頭肌是上調(diào)的，差異有顯著統(tǒng)計學意義P＜0.01。同時發(fā)現(xiàn)實驗組IVSd與對照組的值相比明顯升高，左室射血分數(shù)相

8、對于正常對照組較低(P＜.05);實驗組BNP的水平較對照組表達量高，差異具有明顯意義(P＜0.01);實驗組IncRNABC088254、BNP的表達值對照組明顯上調(diào)，差異有意義(P＜0.05)說明了這三者都與心力衰竭有關，后兩者是國際公認的心機損害程度的標志性因素，也可以大膽的推測IncRNABC088254的作用也類似，還可能是心力衰竭發(fā)生的重要因素。
　　3.為了驗證想法，在心肌細胞肥大體外模型中，RT-PCR結(jié)果顯示在血

9、管緊張素Ⅱ刺激下IncRNABC088254以及相關基因phb2相較于對照組的表達水平上調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義P＜0.01; IncRNABC088254進行干擾之后，結(jié)果證實IncRNABC088254的RNA層面基因表達比陰性對照組和空白對照組低，phb2基因RNA表達層面比陰性對照組和空白對照組也低，差異具有統(tǒng)計學意義P＜0.05。蛋白電泳結(jié)果顯示phb2的蛋白灰度值比陰性對照組和空白對照組低，即蛋白表達水平較無干擾的表達水平低，差