脂肪因子chemerin與充血性心力衰竭的相關性研究.pdf

1、第一部分：脂肪因子chemerin與充血性心胃衰竭的相關性研究
　　目的:晚近發(fā)現(xiàn)的脂肪細胞因子chemerin在胰島素抵抗和免疫炎癥反應中發(fā)揮重要作用。充血性心力衰竭(CHF)與后兩者密切相關。由此本部分檢測CHF患者體循環(huán)中chemerin水平的變化，并探討其與心衰相關臨床生化指標之間的關系。
　　方法:臨床入選52位充血性心力衰竭患者(CHF組)，52位心功能正常的心血管疾病患者(NHF組)，兩組平均年齡70.9±1.

2、6歲，男性比例73％和26例健康人群為正常對照組(NCD組)，平均年齡67.9±2.4歲，男性比例65%，使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測chemerin及TNF-α的外周血濃度，同時檢測相關的臨床生化指標。統(tǒng)計chemerin與各生化指標之間的相關性。
　　結果:①CHF組患者血漿chemerin水平(220.0±9.7ng/ml)較NHF組患者(165.6±8.0ng/ml，P<0.001)及正常對照組(147.2±11.

3、3ng/ml，P<0.001)明顯升高；②CHF組，心力衰竭嚴重程度按紐約心臟協(xié)會(NYHA)分級后分組，心功能 IV級患者的血漿chemerin水平(n=9，294.8±69.0ng/ml)較心功能III級(n=17，221.6±58.7ng/ml，P<0.01)和II級患者(n=26，193.0±63.0ng/ml，P<0.01)更高；③ Spearman相關分析顯示血漿chemerin水平與體質(zhì)指數(shù)(r=0.340，P=0.013

4、)、左室射血分數(shù)(r=-0.337，P=0.014)、甘油三酯(r=0.279，P=0.046)、HOMA-IR(r=0.389，P=0.004)、TNF-α(r=0.379，P=0.006)、NT-proBNP(r=0.336，P=0.008)、同型半胱氨酸(r=0.285，P=0.041)相關；④多元逐步回歸分析顯示在CHF組和NHF組，血漿chemerin水平都與代表胰島素抵抗的指標HOMA-IR(β=0.340，P=0.006)

5、和肥胖相關指標體重指數(shù)BMI(β=0.323，P=0.008)顯著正相關；經(jīng)過年齡和性別校正后，TNF-α(β=0.376，P=0.002)僅在CHF組與血漿chemerin正相關。
　　第二部分：脂肪因子Chemerin在心室重構心臟成纖維細胞增殖中作用的初步研究
　　目的:心臟成纖維細胞(CFb)作為CHF心室重構中的主要參與者，其增殖是心室重構心肌纖維化的重要原因。本部分在本課題臨床部分CHF患者血漿中chemerin

6、水平顯著升高結果基礎上，通過構建體外心肌纖維化模型，并檢測CFb增殖過程中chemerin表達變化，以及沉默chemerin基因表達后，對CFb增殖的影響，初步探討chemerin在心室重構CFb增殖中的作用，明確chemerin在心力衰竭中的可能病理生理作用。
　　方法:1. Chemerin在心臟組織mRNA及蛋白水平表達的檢測:使用聚合酶聯(lián)反應(PCR)檢測心臟組織及心肌細胞及心臟成纖維細胞chemerin mRNA的表達情

7、況；免疫組織化學染色法檢測SD大鼠心臟組織chemerin蛋白的表達；并進一步通過細胞免疫熒光法明確chemerin蛋白在心肌細胞及心臟成纖維細胞的表達定位；2.血管緊張素II(AngII)刺激CFb增殖過程中chemerin表達水平變化的檢測:采用原代細胞培養(yǎng)技術，培養(yǎng)SD大鼠乳鼠的CFb，以AngⅡ1×10-7mol/L誘導CFb增殖建立心肌纖維化細胞模型，分4個時間梯度(0h、6h、12h、24h)進行，采用實時熒光定量PCR(Q

8、T-PCR)檢測CFb增殖過程中設置的時間點chemerin mRNA的表達情況；同時用AngⅡ受體AT1阻滯劑纈沙坦阻斷AngⅡ誘導的CFb增殖，采用QT-PCR檢測chemerin mRNA的表達水平。3. Chemerin在AngII刺激CFb增殖過程中作用的研究:設計及合成chemerin基因的小分子干擾RNA(siRNA)，通過脂質(zhì)體LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染到CFb內(nèi)沉默chemerin基因表達，通過CCK-

9、8實驗觀察chemerin基因沉默對AngⅡ誘導的心臟成纖維細胞增殖的影響。
　　結果:1. chemerin在SD大鼠乳鼠的心臟組織RNA及蛋白水平有表達，細胞免疫熒光顯示主要 chemerin主要存在于心臟成纖維細胞胞漿中，而新生鼠心肌細胞中表達量較低。2.AngII刺激CFb后6小時，chemerin表達量下降至最低，此后chemerin在12小時和24小時后表達量逐漸恢復；使用AT1受體阻滯劑纈沙坦可明顯抑制AngII刺激

10、導致chemerin表達下調(diào)的作用。3.瞬時轉(zhuǎn)染siRNA至CFb，QT-PCR及免疫印跡方法篩選出最有效的沉默片段，沉默效率達X%，使用此片段在CCK-8實驗中沉默CFb中chemerin表達。
　　結論:脂肪因子chemerin主要在心臟成纖維細胞中表達，在AngⅡ刺激CFb增殖的心肌纖維化細胞模型中表達顯著下調(diào)，從而起到保護/損害心肌作用，提示chemerin可能通過內(nèi)分泌、自分泌及旁分泌方式在心力衰竭心室重構過程中發(fā)揮重要