雪松松針總木脂素的提取純化及其體外抗腫瘤活性研究.pdf

1、雪松是松科Pianaceae植物雪松屬Cedrus Trew樹種的泛稱，其針葉為13個(gè)可供藥用的松針之一[1]，雪松松針主要化學(xué)成分有木脂素類、黃酮類、有機(jī)酸類、多糖類及針葉膠等，具有抗腫瘤、抗氧化、抗病毒及蚊蟲毒殺等多種功效。為了開發(fā)利用雪松松針，本文對(duì)雪松松針總木脂素的提取純化工藝和體外抗腫瘤作用進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴雪松松針總木脂素的含量測(cè)定及提取工藝研究：采用磷鉬酸顯色分光光度法，以厚樸酚為對(duì)照品，

2、在最大吸收波長(zhǎng)740nm處測(cè)定雪松松針總木脂素含量，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間為響應(yīng)因子，雪松松針總木脂素含量為響應(yīng)值，根據(jù)Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)進(jìn)行了三因素三水平的試驗(yàn)及響應(yīng)面分析。優(yōu)化得到的雪松松針總木脂素的提取工藝為：乙醇濃度為77.96％、液料比為25:1，提取時(shí)間為1.78 h，在最佳工藝條件，雪松松針總木脂素含量達(dá)到99.2mg/g，與理論預(yù)測(cè)值100.49 mg/g相近。⑵大孔吸附樹脂純化

3、雪松松針總木脂素的工藝研究：以雪松松針總木脂素的吸附率與解吸附率為指標(biāo)，通過對(duì)S-8、D101、AB-8、X-5、NKA-9及HPD-100樹脂的吸附-解吸附能力考察，從中篩選出了適合純化雪松松針總木脂素的大孔樹脂，并確定純化工藝參數(shù)。結(jié)果表明，AB-8樹脂為純化雪松松針總木脂素的優(yōu)良材料；最佳純化工藝為：上樣量為6 BV，濃度為2.18 mg/mL，以1.5mL/min的流速進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附；吸附飽和后，用蒸餾水以1.5 mL/min沖洗

4、5 BV除去水溶性雜質(zhì)及未吸附于柱上的殘液；最后用4BV的80%乙醇以1 mL/min的流速進(jìn)行解吸，收集解析液經(jīng)濃縮、干燥得到平均含量為57.77%的雪松松針總木脂素提取物。⑶雪松松針總木脂素及蛇床子素的抗腫瘤活性評(píng)價(jià)：選用人宮頸癌 HeLa細(xì)胞株、人胃癌細(xì)胞株 MKN45、人肺癌細(xì)胞株 A549、人肝癌細(xì)胞株 HepG2及人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29，采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法進(jìn)行體外細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)，篩選

5、雪松松針總木脂素及其從中分離得到的木脂素單體蛇床子素的敏感瘤株。結(jié)果表明，雪松松針總木脂素和蛇床子素對(duì)5種腫瘤細(xì)胞的增殖均有較強(qiáng)的抑制作用，雪松松針總木脂素的抑制作用從強(qiáng)到弱依次為 A549＞HeLa＞HepG2＞HT-29＞MKN45；蛇床子素的抑制作用從強(qiáng)到弱依次為 A549＞HepG2＞HT-29＞MKN45＞HeLa，其中雪松松針總木脂素和蛇床子素對(duì)人肺癌細(xì)胞株A549作用最強(qiáng)，IC50分別為39.82μ g/mL和35.68μ