硫酸類肝素-3-0-磺基轉(zhuǎn)移酶B1(HS3ST3B1)對(duì)乙型肝炎病毒(HBV)復(fù)制的下調(diào)作用.pdf

1、目的：在HBV的生命周期中，HBV的復(fù)制是受到宿主和自身各種因素控制的。本課題旨在研究宿主因子HS3ST381對(duì)HBV復(fù)制的影響，并探討可能的作用機(jī)制。
　　 方法：將HS3ST381與HBV表達(dá)質(zhì)粒pCH9-HBV共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，利用Southern blot和實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time PCR)技術(shù)檢測(cè)過表達(dá)HS3ST381后HBV復(fù)制水平和總RNA水平的變化；同時(shí)，干擾過表達(dá)HS3ST381后，檢測(cè)HBV

2、復(fù)制水平和總RNA水平的變化；干擾內(nèi)源性HS3ST3BI后，檢測(cè)HBV復(fù)制水平的變化。在HBV穩(wěn)定細(xì)胞株HepG2. H7中轉(zhuǎn)染不同量HS3ST381，檢測(cè)HBV復(fù)制水平的變化；利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)過表達(dá)HS3ST381后HBV啟動(dòng)子活性的改變，及干擾過表達(dá)的HS3ST381后HBV啟動(dòng)子活性的改變。
　　 結(jié)果：Southern blot顯示：在HBV瞬時(shí)表達(dá)模型中，過表達(dá)HS3ST381后，HBV DNA水平有明顯下降

3、。RNAi干擾過表達(dá)HS3ST381后，HBV DNA水平則有所恢復(fù)；干擾內(nèi)源性HS3ST381，HBV DNA水平有一定程度上升；在HBV穩(wěn)定表達(dá)模型H7中，不僅進(jìn)一步證實(shí)HS3ST381對(duì)HBV復(fù)制的下調(diào)作用，而且HBV DNA水平隨著HS3ST381轉(zhuǎn)染量增加而下降，呈現(xiàn)出HS3ST381的濃度依賴性。Real-time PCR顯示：過表達(dá)HS3ST381后，HBV總RNA水平有明顯下調(diào)，而干擾過表達(dá)HS3ST381后，HBV總R