果蠅嗅覺受體蛋白的無細(xì)胞體系表達研究.pdf

1、膜蛋白是一類龐大的蛋白質(zhì)家族，在生物體的生命活動中發(fā)揮著重要作用。膜蛋白不僅具有強烈的疏水性，而且需要定位到細(xì)胞膜上，導(dǎo)致其表達困難。迄今為止，由于很難獲得正確的膜蛋白，導(dǎo)致沒有任何膜蛋白獲得結(jié)構(gòu)解析。無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)是一種能夠在體外表達蛋白質(zhì)的系統(tǒng)，其特點為表達體系具有開放性、不受活體細(xì)胞生命限制、高效和快速。針對膜蛋白的特殊性和表達需求，我們嘗試用無細(xì)胞的方法進行膜蛋白的表達。
　　本論文對無細(xì)胞表達體系的構(gòu)成及溫度、表達

2、時間等實驗條件進行了研究，成功建立了適合于膜蛋白表達的無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成平臺。利用建立的表達平臺，成功表達出果蠅嗅覺受體蛋白質(zhì)Or83b、Or7a和Or42a，最高表達量達到313μg/ml，實現(xiàn)了嗅覺受體蛋白的高濃度大量表達，為膜蛋白的后續(xù)研究提供堅實基礎(chǔ)。最后還探索了七種去污劑Brij35、Brij58、Triton100、Triton114、NP40、Tween20、Tween80對表達的影響，找到了對各蛋白可溶性表達最有效的去污劑