枸杞蛋白酶解液對SHR大鼠的降壓效果研究.pdf

1、目的：高血壓是心血管疾病發(fā)病的最重要危險因素之一。對血壓的控制是降低心腦血管疾病的發(fā)病率、致殘率和死亡率的有效措施。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制肽是通過影響腎素-血管緊張素系統(tǒng)和激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)而調(diào)節(jié)機體血壓的。合成的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑是目前用于治療高血壓的重要藥物，食物蛋白源性ACE抑制肽因其安全性高成為活性肽研究領域的熱點。本實驗通過堿提酸沉法，從枸杞中提取枸杞蛋白，并利用蛋白酶分解所得枸杞蛋白酶解液，觀察其對自

2、發(fā)性高血壓大鼠的降壓效果，為制備天然枸杞ACE抑制肽和臨床防治高血壓病提供理論依據(jù)。
　　方法：選取10-11周齡，體重240-280g的雄性高血壓大鼠（SHR）40只和正常Wistar-Kyoto(WKY)大鼠8只，經(jīng)適應性喂養(yǎng)1W后，根據(jù)所測基礎血壓及體重，按隨機數(shù)字隨機分為6組(每組8只)，分別為：WKY正常對照組、陽性對照組、陰性對照組、低劑量組（枸杞蛋白酶解液40mg/kg）、中劑量組（枸杞蛋白酶解液80mg/kg）和高

3、劑量組（枸杞蛋白酶解液100mg/kg）。實驗組經(jīng)灌胃給予不同濃度的枸杞蛋白酶解液，陰性對照組和WKY正常對照組灌胃給予相應劑量的蒸餾水，陽性對照組灌胃給予10mg/kg卡托普利。各組動物每日灌胃1次，實驗周期為9W，實驗期內(nèi)各組動物自由進食飲水。采用無創(chuàng)多通道尾動脈測壓實驗系統(tǒng)于每周在固定時間測量大鼠清醒狀態(tài)下的尾動脈SBP、DBP和心率，每次測血壓3次，取3次測定的平均值為該測試點的血壓和心率值。比較各組大鼠血壓變化，同時觀察大鼠的

4、毛色、激惹度、飲水量等。飼養(yǎng)結(jié)束后，戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈取血，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定大鼠血漿中血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的含量，Real-time PCR法比較WKY、SHR大鼠心臟和腎臟組織中ACE、AT1R、ACE2和MasR mRNA的表達水平。
　　結(jié)果：①大鼠的一般行為觀察：實驗期間，WKY組的大鼠鼠毛有光澤，雙眼靈活有神，行動敏捷，對周圍變化反應靈敏；SHR大鼠鼠毛無光澤且飲水量多，同時在提尾或捉持頸部時，抵抗劇烈、

5、尖叫、暴跳，同籠大鼠頻繁打斗、咬人等攻擊性。SHR大鼠經(jīng)兩周治療后，精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，毛發(fā)逐漸有光澤。②大鼠進食量、體重及心率變化：SHR大鼠的進食量均明顯高于WKY（P＜0.05），但SHR大鼠間進食量無明顯差異（P＞0.05）。實驗前，各組大鼠的體重，兩兩比較差異無顯著性（P＞0.05）。實驗結(jié)束時，與WKY相比，SHR大鼠各組的體重均明顯下降（P＜0.05），但各組之間心率無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。③大鼠臟器質(zhì)量與臟器系數(shù)：與WK

6、Y組相比較，各組SHR大鼠心臟系數(shù)、腎臟系數(shù)和肝臟系數(shù)均明顯升高（P＜0.05）；但肺臟系數(shù)和脾臟系數(shù)無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。④枸杞蛋白酶解液對SHR大鼠血壓的影響：實驗開始時，SHR大鼠各組血壓均明顯高于WKY組（P＜0.05），但SHR大鼠各組間無明顯差異（P＞0.05）。實驗結(jié)束時，與陰性對照組相比較，陽性對照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組大鼠血壓明顯降低。⑤枸杞蛋白酶解液對SHR大鼠血漿AngⅡ含量的影響：與WKY組比較

7、，陰性對照組和高劑量組的AngⅡ含量均顯著升高；與陰性對照組比較，低劑量組和陽性對照組的AngⅡ含量均顯著下降（P＜0.05）；中、高劑量組的AngⅡ含量均無明顯差異（P＞0.05）。⑥WKY、SHR大鼠腎臟組織中ACE、AT1R、ACE2和MasR mRNA的表達水平：與WKY組（1.000±0.085）相比，陰性對照組（2.624±0.631）、中劑量組（2.287±1.716）和高劑量組（2.396±0.632）大鼠腎臟中ACEm

8、RNA表達水平均顯著升高（P＜0.05）；與陰性對照組相比（2.624±0.631），陽性對照組（1.230±0.540）和低劑量組（1.260±0.643）ACEmRNA表達水平均顯著降低(P＜0.05)；與WKY組相比，SHR大鼠腎臟中ACE2mRNA表達水平均顯著下降(P<0.05)，與陰性對照組（0.427±0.085）相比，陽性對照組（0.659±0.134）和低劑量組（0.601±0.134）ACE2mRNA表達水平均顯著升