內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)劑2-脫氧-D-葡萄糖抑制豬流行性腹瀉病毒感染的機(jī)制研究.pdf

1、豬流行性腹瀉(porcine epidemic diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(porcineepidemic diarrhea virus，PEDV)引起的一種豬腸道傳染性疾病。臨床表現(xiàn)為水樣腹瀉、嘔吐、脫水，常于冬季爆發(fā)大流行。PED雖然最先爆發(fā)在歐洲，但目前在一些亞洲的養(yǎng)豬國家流行十分嚴(yán)重，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2013年，PEDV迅速在美國豬場間流行。目前TGEV和PEDV的二聯(lián)滅活苗和弱毒苗的應(yīng)用雖然大

2、大降低了兩種病毒病的發(fā)生率，但是我國PED的發(fā)病率仍呈逐年上升趨勢。爆發(fā)該病時無特效抗病毒藥物可以使用。
　　非折疊蛋白反應(yīng)(Unfolded Protein Response，UPR)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)中出現(xiàn)大量蛋白質(zhì)合成時發(fā)生的一種細(xì)胞保護(hù)性機(jī)制。許多研究表明，病毒感染可以激活宿主細(xì)胞的非折疊蛋白反應(yīng)。在本研究中，首先通過透射電鏡分析了感染PEDV的細(xì)胞以便確定病毒感染是否引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)感染PEDV的細(xì)胞形態(tài)較對照

3、細(xì)胞有明顯變化，出現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹。同時還發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)較多大小不一的囊泡，囊泡中含有病毒粒子。通過免疫印跡和實(shí)時定量PCR方法確定PEDV感染Vero細(xì)胞能誘導(dǎo)UPR反應(yīng)，并且在感染24小時后UPR的三條通路變化顯著。同時，在通過RNA干擾方法降低UPR通路中PERK蛋白表達(dá)時會導(dǎo)致病毒感染能力的增加，這與能夠緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的化合物4-PBA處理后的結(jié)果一致。
　　2-脫氧-D-葡萄糖(2-DG)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)劑。進(jìn)一步研究

4、了2-DG對PEDV增殖的影響。噬斑試驗、實(shí)時定量PCR和免疫印跡分析表明，2-DG能夠通過影響病毒感染過程早期階段的病毒蛋白質(zhì)的翻譯過程來抑制病毒增殖。同時還發(fā)現(xiàn)2-DG能夠影響病毒粒子的組裝，這與之前流感病毒的研究結(jié)果相似。這說明與2-DG相似的葡萄糖/甘露糖的類似物可能通過誘導(dǎo)UPR來抑制病毒增殖。許多病毒感染可以激活UPR。研究表明通過調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞非折疊蛋白反應(yīng)能夠抑制病毒感染。對2-DG抗病毒機(jī)制的研究表明2-DG抑制病毒的作