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文檔簡介
1、目的:
對結(jié)痂酊組方中藥進行生藥學(xué)研究,建立結(jié)痂酊有效組分的含量測定方法,確定最佳的提取和純化的工藝,考察其體外抗菌、抗氧化活性,觀察其對燙傷大鼠的治療作用,并初步探討其作用機制。
方法:
1.通過性狀及顯微鑒別對結(jié)痂酊中兒茶、黃芩、黃柏進行鑒定。
2.采用HPLC法測定結(jié)痂酊有效組分的含量,正交設(shè)計法優(yōu)化提取工藝;大孔樹脂吸附法確定最佳純化工藝。
3.采用試管二倍稀
2、釋法研究結(jié)痂酊有效組分的抗菌活性,通過測定電導(dǎo)率、掃描電鏡、透射電鏡的方法初步研究其作用機制。
4.采用Folin法測定結(jié)痂酊有效組分的總酚含量,采用FRAP法、鐵氰化鉀還原法、DPPH法、ABTS法、羥自由基法和超氧陰離子自由基清除法測定結(jié)痂酊有效組分的抗氧化能力。
5.建立大鼠燙傷模型,通過形態(tài)學(xué)、病理學(xué)觀察結(jié)痂酊有效組分對燙傷大鼠的治愈情況,通過檢測大鼠血清中SOD、MDA、NO以及TNF-a、IL-1
3、β、IL-6水平,進一步探討結(jié)痂酊有效組分治療燙傷的作用機制。
結(jié)果:
1.經(jīng)過大連醫(yī)科大學(xué)刁云鵬副教授鑒定,兒茶、黃芩、黃柏均是正品。
2.正交設(shè)計確定的最佳提取工藝為30℃,70%的乙醇提取3次,每次提取30min;建立的反相高效液相色譜法系統(tǒng)穩(wěn)定性良好,而且兒茶素濃度在100-800μg/mL、黃芩苷15-120μg/mL、小檗堿在7-56μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。選擇HP20型
4、號大孔吸附樹脂用不同濃度乙醇進行梯度洗脫,10%乙醇洗脫出來的兒茶素的含量較高,30%乙醇洗脫的成分中黃芩苷的含量較高,50%乙醇洗脫的成分中小檗堿的含量較高。
3.體外抗菌實驗,結(jié)痂酊的10%乙醇提取物抗菌活性較高,MBC為0.5mg/mL,在此濃度下,18h時可將細菌全部殺死,通過測定電導(dǎo)率、透射電鏡和掃描電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)其抗菌作用與破壞細菌細胞壁,影響細胞膜的通透性密切相關(guān)。
4.結(jié)痂酊提取物純
5、化產(chǎn)物總酚含量:10%乙醇純化物>30%乙醇純化物>50%乙醇純化物;抗氧化實驗中,10%乙醇純化物的抗氧化能力最強,結(jié)痂酊有效組分的抗氧化能力隨著總酚含量的增多而逐漸增大。
5.大鼠體內(nèi)燙傷實驗,結(jié)痂酊有效組分治療作用顯著,與對照組比較,給藥組創(chuàng)面面積明顯減小,愈合時間明顯縮短。病理學(xué)觀察,結(jié)痂酊有效組分能夠有效抑制炎癥因子的生長,促進成纖維細胞、肉芽組織、毛囊等再生。結(jié)痂酊有效組分能夠升高燙傷大鼠血清中SOD活性,降低
6、MDA、NO含量,減輕脂質(zhì)過氧化損傷,明顯提高大鼠體內(nèi)抗氧化的能力;同時顯著降低燙傷血清中炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β、IL-6的含量,減輕組織的水腫程度,對創(chuàng)面起到保護作用。
結(jié)論:
本課題對結(jié)痂酊方劑中的中藥飲片進行鑒定;確立結(jié)痂酊有效組分的最佳提取工藝;優(yōu)選了最有效的純化方式;建立了準確,可靠,重現(xiàn)性好的HPLC法,用來測定有效成分的含量;結(jié)痂酊有效組分具有較好的體外抗菌、抗氧化活性;結(jié)痂酊有效組分對
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