間質(zhì)蛋白Periostin對鼻咽癌6-10B細胞凋亡的影響及其機理的初步研究.pdf

1、目的：前期研究發(fā)現(xiàn)Periostin（POSTN）是高表達于鼻咽癌間質(zhì)的一種分泌蛋白。臨床資料分析發(fā)現(xiàn)POSTN與鼻咽癌的轉(zhuǎn)移及患者預后密切相關(guān)，體外實驗證實POSTN可以促進鼻咽癌細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究擬在前期研究的基礎上，進一步探究POSTN對鼻咽癌細胞凋亡的影響及其可能的機理。
　　方法：利用本室保存的鼻咽癌6-10B系列細胞株6-10B、6-10B-GFP(為穩(wěn)轉(zhuǎn)了空載體的6-10B)、6-10B-POSTN（為穩(wěn)

2、轉(zhuǎn)了POSTN的6-10B），經(jīng)Western Blot驗證POSTN表達效果。接著用Western blot檢測POSTN轉(zhuǎn)染前后，6-10B細胞中P53、P-AKT、BAX等凋亡相關(guān)蛋白的表達水平；流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率的改變。免疫組化檢測正常鼻咽黏膜組織和鼻咽癌組織中P53蛋白的表達水平。提取穩(wěn)轉(zhuǎn)了POSTN的6-10B系列細胞和穩(wěn)轉(zhuǎn)了POSTN的成纖維系列細胞培養(yǎng)上清，分別刺激6-10B細胞，檢測刺激前后6-10B細胞中P53

3、、P-AKT、BAX等凋亡相關(guān)蛋白的表達水平。最后，構(gòu)建能穩(wěn)定干擾人P53表達的shRNA干擾載體，用shRNA干擾載體分別轉(zhuǎn)染鼻咽癌細胞6-10B、6-10B-GFP、6-10B-POSTN細胞，Western Blot驗證干擾的效果，流式細胞術(shù)檢測P53干擾前后6-10B系列細胞的凋亡率。
　　結(jié)果：
　?。?）6-10B-POSTN細胞組凋亡率較6-10B組和6-10B-GFP組明顯提高，6-10B-POSTN細胞內(nèi)P

4、53、BAX蛋白表達上調(diào)，P-AKT表達下調(diào)。
　?。?）與正常的鼻咽黏膜組織相比，鼻咽癌組織中的P53蛋白表達水平明顯升高。
　?。?） 6-10B-POSTN細胞培養(yǎng)上清能促進6-10B的凋亡，而來自3T3-POSTN培養(yǎng)上清并不能促進6-10B的凋亡。
　?。?）成功構(gòu)建能夠穩(wěn)定干擾6-10B細胞P53基因的shRNA載體，干擾6-10B細胞中的P53并不能降低6-10B細胞的凋亡率，而POSTN可以提