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文檔簡介
1、目的：構(gòu)建含有Hygromycin抗性的穩(wěn)定表達HBV的細胞研究模型。
方法：構(gòu)建pSEH-Flag-HBV重組質(zhì)粒，經(jīng)酶切和測序鑒定，脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染HepG2細胞，Hygromycin篩選，ELISA檢測細胞上清液HBsAg、HBeAg的表達情況，選擇HBsAg、HBeAg表達量均高的細胞株進行下一步的檢測，PCR、Southern blotting檢測細胞內(nèi)HBV DNA，RT-PCR檢測細胞HBx、Hygromyci
2、n基因mRNA的表達，Westernblotting檢測細胞C蛋白的表達。
結(jié)果：成功構(gòu)建HBV全基因克隆質(zhì)粒pSEH-flag-HBV，轉(zhuǎn)染HepG2細胞后，培養(yǎng)液上清HBsAg，HBeAg陽性，Western blotting檢測HBc在蛋白水平有表達，RT-PCR檢測到HBx、Hygromycin在mRNA水平有表達，Southern blotting驗證了HepG2細胞基因組中有HBV片段的單一整合。
結(jié)論：
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