熱敏感的生精作用特異表現(xiàn)基因Esx1的啟動子作用研究.pdf

1、Esx1(Extra-embryonic tissue-spermatogenesis-homeobox gene1)系一X性聯(lián)同源箱(X-linked homeobox)蛋白基因，具有三個mRNA的異構(gòu)型，分別是a型、b型及x型。序列比對發(fā)現(xiàn)，彼此差異主要在5'端的非轉(zhuǎn)譯區(qū)(5'-untranslated regions)與部分下游序列。這些不同異構(gòu)型的表現(xiàn)明顯地是受到不同的啟動子區(qū)域所調(diào)節(jié)，而此調(diào)節(jié)又高度地對熱敏感。為了了解Esx1

2、的組織特異性表現(xiàn)，分別抽取小鼠睪丸及胎盤的總RNA進(jìn)行定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)(quantitative RT-PCRanalyses)。結(jié)果顯示在睪丸中主要表現(xiàn)a型及x型mRNA，而胎盤中主要表現(xiàn)x型。為了解存在于啟動子區(qū)域(promoter region)內(nèi)的近端作用因子(cis-actingelements)，首先透過短暫性轉(zhuǎn)染(transient transfection)分析小鼠Esx1基因的整個5'端鄰近區(qū)域(5'-flan

3、king sequences)（核苷酸序列從-1493到+464），其后再利用泳動遲滯試驗(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)及DNaseⅠ足跡試驗(DNaseⅠ footprinting analysis，DFA)作佐證。報導(dǎo)基因分析結(jié)果顯示核苷酸序列-1015到-459可在分離的初級精母細(xì)胞(primary spermatocytes)及圓形精細(xì)胞(roundspermatids)

4、內(nèi)驅(qū)動下游的熒光酵素基因大量表現(xiàn);核苷酸序列從+14到+189可在分離的精原細(xì)胞(spermatogonia)內(nèi)啟動報導(dǎo)基因的基礎(chǔ)表現(xiàn)。DFA及EMSA則進(jìn)一步地證實序列-901到-882能夠?qū)Ｒ坏嘏c睪丸及圓形精細(xì)胞總核蛋白萃取液結(jié)合，唯與胎盤、腦及肝臟總核蛋白質(zhì)萃取液則否。利用TESS(transcription elementsearch system)數(shù)據(jù)庫比對此20個鹼基發(fā)現(xiàn)，CACCC結(jié)合蛋白可能為調(diào)控睪丸中Esx1基因選擇性