BMP-7對胚胎小鼠髓核細胞成骨分化和Notch信號表達的表達.pdf

1、目的：
　　探索骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7，BMP-7）誘導胚胎小鼠椎間盤髓核細胞(nucleus pulposus，NP)的成骨分化及對經(jīng)典Notch信號通路的調控作用。
　　方法：
　　重組腺病毒BMP-7、GFP、Jag-1、和RFP在HEK293細胞中擴增，感染NP細胞。RT-PCR檢測BMP-7的mRNA水平表達;Real-time PCR檢測成骨指標骨橋蛋白

2、(osteopontin，OPN)、骨保護素(osteoprotegerin，OPG)以及經(jīng)典Notch信號通路分子的mRNA表達水平;Western blot檢測成骨轉錄因子Runx2和OPN的蛋白表達水平;采用堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)讀數(shù)和ALP染色檢測ALP活性。
　　結果：
　　Ad-BMP-7、Ad-GFP、 Ad-Jag-1和Ad-RFP在HEK293細胞中高滴度的擴增。NP

3、細胞中BMP-7的基礎表達很低，Ad-BMP-7感染NP細胞可高表達BMP-7，并顯著提高OPN、OPG的mRNA水平表達(OPN: P=0.000;OPG: P=0.012)，成骨轉錄因子Runx2及OPN的蛋白表達水平也均高于對照組，特異性成骨指標ALP的活性明顯增強，ALP染色呈紫藍色，顯著高于對照組(P=0.000)。Ad-BMP-7感染3d可促進Notch信號通路Notch-1、Notch-2、Jag-1、Hey-1的mRNA

4、水平表達增高（Notch-1:P=0.002;Notch-2:P=0.000;Jag-1: P=0.000; Hey-1:P=0.000），但第7d回復到基礎表達水平，其余信號分子表達無明顯差異。Ad-Jag-1進一步活化Notch信號通路后，Ad-BMP-7+Ad-Jag-1組的Runx2和OPN的蛋白表達水平以及ALP活性明顯增加，較對照組具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。
　　結論：
　　腺病毒介導的BMP-7可誘導N