免疫熒光技術(shù)在自身免疫性水皰病及先天性大皰性表皮松解癥診斷中的應(yīng)用.pdf

1、免疫熒光是一種重要的熒光標(biāo)記診斷技術(shù)，利用熒光素標(biāo)記相應(yīng)抗體，通過抗原抗體相互作用檢測組織或血液中是否存在相應(yīng)抗原或抗體，從而對其進行定位診斷。該方法在自身免疫性水皰病的診斷中占據(jù)著尤為重要的地位，近年來此方法也逐漸擴展至先天性大皰性表皮松解癥的定位診斷中。本研究主要探討免疫熒光技術(shù)在自身免疫性水皰病及先天性大皰性表皮松解癥診斷中的應(yīng)用。
　　第1部分 間接免疫熒光在自身免疫性表皮內(nèi)水皰病診斷中的應(yīng)用
　　目的:應(yīng)用間接免疫

2、熒光的方法，比較正常人皮膚、猴食管及鹽裂正常人皮膚三種不同底物檢測自身免疫性表皮內(nèi)水皰病循環(huán)抗體的沉積情況及其敏感性和特異性差異。
　　方法:選取診斷明確天皰瘡71例為病例組，對照組包括自身免疫性表皮下水皰病26例、慢性濕疹15例和正常對照15例，分別進行正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚為底物的間接免疫熒光，觀察熒光抗體的沉積情況,比較不同種類自身免疫性表皮內(nèi)水皰病行不同底物間接免疫熒光的敏感性和特異性及其差異。
　　結(jié)果

3、:天皰瘡患者在以正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚三種底物行間接免疫熒光中呈陽性者均可見到表皮棘細胞間熒光物質(zhì)網(wǎng)狀沉積。以正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚為底物行間接免疫熒光對天皰瘡診斷的敏感性分別為31.0％、83.1％、70.4％，特異性分別為96.4％、96.4％、94.6％。三種不同底物對天皰瘡診斷敏感性進行比較，正常人皮膚間接免疫熒光與猴食管及鹽裂間接免疫熒光間差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001);在Dsg1、Dsg3均陽性

4、和僅Dsg1陽性天皰瘡患者中，正常人皮膚間接免疫熒光與鹽裂間接免疫熒光間差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);三種不同底物行間接免疫熒光對天皰瘡診斷的特異性間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);僅Dsg3陽性天皰瘡患者在以猴食管為底物時診斷敏感性明顯高于僅Dsg1陽性天皰瘡患者，且兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);在僅Dsg1陽性天皰瘡患者中對猴食管間接免疫熒光陰性與陽性患者抗Dsg1 ELISA指數(shù)水平進行比較，兩者抗體水平無顯著性

5、差異(P＞0.05)，對鹽裂間接免疫熒光陰性與陽性兩組患者其抗Dsg1 ELISA指數(shù)水平進行比較兩者同樣無顯著性差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:對于天皰瘡，猴食管和鹽裂正常人皮膚為底物間接免疫熒光敏感性均高于以正常人皮膚為底物間接免疫熒光，而猴食管與鹽裂正常人皮膚間接免疫熒光間敏感性無顯著性差異，因此，在猴食管不易取得時，可使用鹽裂間接免疫熒光替代正常人皮膚間接免疫熒光。且猴食管為底物間接免疫熒光對于存在Dsg3抗體的患者敏感

6、性高于僅有Dsg1抗體的患者。猴食管、鹽裂正常人皮膚間接免疫熒光的結(jié)果與Dsg1 ELISA指數(shù)水平無關(guān)。
　　第2部分 間接免疫熒光在自身免疫性表皮下水皰病診斷中的應(yīng)用
　　目的:應(yīng)用間接免疫熒光的方法，比較正常人皮膚、猴食管及鹽裂正常人皮膚三種不同底物檢測自身免疫性表皮下水皰病循環(huán)抗體的沉積情況及其敏感性和特異性差異。
　　方法:選取自身免疫性表皮下水皰病26例為病例組，對照組包括天皰瘡71例，慢性濕疹15例及正常

7、對照15例，分別進行正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚為底物的間接免疫熒光，觀察熒光抗體的沉積情況，比較不同種類自身免疫性表皮下水皰病行不同底物間接免疫熒光的敏感性和特異性及其差異。
　　結(jié)果:大皰性類天皰瘡患者在以正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚三種底物行間接免疫熒光中呈陽性者均可見到熒光物質(zhì)沿基底膜帶呈線性沉積，鹽裂正常人皮膚間接免疫熒光可見大皰性類天皰瘡患者熒光物質(zhì)線性沉積于表皮側(cè)，而獲得性大皰性表皮松解癥和P200類天皰

8、瘡患者線性沉積于真皮側(cè)。三種底物（正常人皮膚、猴食管、鹽裂正常人皮膚）在自身免疫性表皮下水皰病診斷中的敏感性分別為42.3％、69.2％、96.1％，特異性分別為98％、100％、97％，其中在大皰性類天皰瘡患者中診斷的敏感性分別為40.0％、75.0％、90.0％;三種不同底物對于表皮下水皰病診斷的敏感性比較，正常人皮膚間接免疫熒光與鹽裂間接免疫熒光間差異均存在統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)，猴食管間接免疫熒光與鹽裂間接免疫熒光間差異均

9、存在統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);三者特異性間均無顯著性差異(P＞0.05)。在大皰性類天皰瘡中三種不同底物診斷的敏感性比較，正常人皮膚間接免疫熒光與鹽裂間接免疫熒光間差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。猴食管間接免疫熒光陰性與陽性兩組大皰性類天皰瘡患者抗BP180 ELISA指數(shù)相比兩者抗體水平無顯著性差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:鹽裂正常人皮膚間接免疫熒光對于自身免疫性表皮下水皰病的診斷優(yōu)于以猴食管和正常人皮膚為底物的間接免

10、疫熒光。猴食管間接免疫熒光的結(jié)果與BP180 ELISA指數(shù)水平無關(guān)。
　　第3部分 鹽裂間接免疫熒光在自身免疫性表皮下水皰病診斷中的應(yīng)用
　　目的:使用鹽裂間接免疫熒光的方法協(xié)助診斷3例特殊自身免疫性表皮下水皰病。
　　方法:運用鹽裂間接免疫熒光的方法篩出特殊自身免疫性表皮下水皰病，使用酶聯(lián)免疫吸附試驗及免疫印跡的方法輔助明確診斷。
　　結(jié)果:明確診斷1例大皰性類天皰瘡，1例獲得性大皰性表皮松解癥及1例P200

11、類天皰瘡。
　　結(jié)論:鹽裂間接免疫熒光表皮側(cè)線狀沉積提示為大皰性類天皰瘡;鹽裂間接免疫熒光真皮側(cè)線狀沉積需進一步完善ELISA及免疫印跡明確循環(huán)中相關(guān)抗體從而確定診斷。
　　第4部分 免疫熒光在先天性大皰性表皮松解癥分型診斷中的應(yīng)用
　　目的:通過對先天性大皰性表皮松解癥患者皮損進行不同抗體的熒光及免疫組化標(biāo)記，對其進行分型診斷。
　　方法:收集2015年1月-6月中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病醫(yī)院門診先天性大皰性表皮松解

12、癥患者5例，取其新發(fā)水皰處皮損分別制成冰凍切片及石蠟切片，分別使用免疫熒光和免疫組化的方法對其進行角蛋白K14、Ⅳ型膠原、Ⅶ型膠原標(biāo)記，同時使用正常人皮膚及鹽裂正常人皮膚作對比，使用顯微鏡觀察患者皮損處相應(yīng)抗體標(biāo)記部位，根據(jù)標(biāo)記部位不同進行結(jié)果的判斷。
　　結(jié)果:單純型大皰性表皮松解癥患者角蛋白K14標(biāo)記于水皰中或頂部，Ⅳ型膠原標(biāo)記水皰底部;鹽裂正常人皮膚角蛋白K14標(biāo)記于裂隙頂部，Ⅳ型膠原與Ⅶ型膠原標(biāo)記裂隙底部;營養(yǎng)不良型大皰性