Cajal間質(zhì)細(xì)胞的自噬與慢傳輸型便秘之間的關(guān)系.pdf

1、目的：研究慢傳輸型便秘（STC）發(fā)生與Cajal間質(zhì)細(xì)胞自噬之間的關(guān)系
　　方法：清潔級(jí)健康雄性SD大鼠60只，體重200~250g之間，隨機(jī)分2組，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組每組各30只大鼠。實(shí)驗(yàn)組大鼠按照50 mg/kg鹽酸小檗堿劑量以10 ml/kg的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組大鼠進(jìn)行連續(xù)灌胃14天，對(duì)照組大鼠以同實(shí)驗(yàn)組等量的生理鹽水灌胃14天。14天后各組大鼠禁食16h然后使用墨汁活性炭懸液灌胃處理大鼠，通過檢測(cè)墨汁灌胃后6h大鼠排便粒數(shù)，首次排黑便

2、時(shí)間以及糞便含水量確認(rèn)STC造模是否成功。鑒定造模成功后,分別通過Western Blot和免疫組化法檢測(cè)兩組大鼠腸內(nèi)酪氨酸蛋白激酶受體（c-Kit蛋白）的表達(dá)水平以反映結(jié)腸腸道內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞的變化情況。然后使用透射電鏡TEM法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞自噬泡的水平并使用Western Blot法檢測(cè)結(jié)腸組織自噬相關(guān)標(biāo)志蛋白Beclin-1，LC3的表達(dá)變化。最后使用流式細(xì)胞法和免疫熒光法相結(jié)合來檢測(cè)大鼠腸道肌群中IC

3、Cs細(xì)胞內(nèi)Ca2+離子的濃度變化。試驗(yàn)中采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS16.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，組間數(shù)據(jù)兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05為結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：1、灌胃后實(shí)驗(yàn)組大鼠體重與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過墨汁灌胃后6h大鼠排便粒數(shù)，首次排便時(shí)間以及糞便含水量的檢測(cè)結(jié)果顯示，50 mg/kg鹽酸小檗堿灌胃14天后，實(shí)驗(yàn)組大鼠的糞便粒數(shù)和糞便含水量均降低，兩組數(shù)據(jù)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），同時(shí)，實(shí)

4、驗(yàn)組大鼠的首次排黑便時(shí)間延后（P＜0.05），表明大鼠腸道傳輸功能受阻，體現(xiàn)了慢傳輸型便秘的癥狀。結(jié)果顯示使用鹽酸小檗堿造大鼠慢傳輸型便秘模型成功。2、免疫組化法檢測(cè)大鼠腸道組織結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組大鼠腸道內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化且細(xì)胞數(shù)量有所降低,與對(duì)照組相比數(shù)據(jù)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Western Blot法檢測(cè)大鼠腸道內(nèi)蛋白表達(dá)的結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，大鼠腸道內(nèi)c-Kit蛋白表達(dá)明顯減少。結(jié)果表明鹽酸

5、小檗堿引發(fā)Cajal間質(zhì)細(xì)胞的變化可能是導(dǎo)致大鼠慢傳輸型便秘的原因。3透射電鏡TEM檢測(cè)大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)自噬泡水平的結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組大鼠腸道內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞自噬泡形成，與對(duì)照組相比其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Western Blot法檢測(cè)Cajal間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)自噬標(biāo)志蛋白的結(jié)果表明，Cajal間質(zhì)細(xì)胞自噬蛋白Beclin-1，LC3表達(dá)均顯著上調(diào)，表明大鼠慢傳輸型便秘的發(fā)生可能與Cajal間質(zhì)細(xì)胞的過度自噬導(dǎo)致的自噬

6、性死亡有關(guān)。4通過流式細(xì)胞法和免疫熒光法，以Ca2+熒光指示劑檢測(cè)法檢測(cè)ICCs中游離Ca2+離子的濃度變化的結(jié)果顯示，慢傳輸型便秘大鼠模型中Cajal間質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+離子升高，Ca2+離子升高可能是導(dǎo)致Cajal間質(zhì)細(xì)胞自噬性死亡的原因。
　　結(jié)論：1慢傳輸型便秘大鼠模型中大鼠腸道內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)萎縮并且數(shù)量減少。2慢傳輸型便秘大鼠模型腸道內(nèi)Cajal間質(zhì)細(xì)胞發(fā)生了明顯的細(xì)胞自噬現(xiàn)象，這可能是引發(fā)Cajal間