慢傳輸型便秘大鼠血漿及腸道胃動素變化的實驗研究.pdf

1、目的： 本研究課題利用大黃灌胃建立慢傳輸型便秘大鼠模型，通過測定模型大鼠血漿及十二指腸、回腸、橫結腸組織勻漿中胃動素(MTL)含量，觀察模型大鼠腸道胃動素免疫反應性變化，探討血漿及腸道MTL水平與慢傳輸型便秘的關系。 方法： 1、動物分組：選取健康Wistar大鼠40只，雌雄各半，按照完全隨機的方法進行分組，實驗組20只，對照組20只，分組后各組間體重、性別無顯著性差異。 2、動物處理：實驗組采用大黃浸液

2、灌胃，首日劑量為800mg/kg(生粉)，此后每日劑量在前一日基礎上增加200mg/kg(生粉)，直至實驗組出現(xiàn)半數(shù)大鼠糞便變稀，保持劑量至80％的稀便消失，繼續(xù)加量給藥，至又有半數(shù)大鼠糞便變稀，如此程序循環(huán)3次，待實驗組第三次80％的稀便消失一周后停止建模，對照組以同等體積蒸餾水灌胃。 3、標本取材：實驗組及對照組大鼠禁食8小時后乙醚麻醉，股動脈取抗凝血3ml，切取距幽門5cm十二指腸、距回盲瓣5cm回腸、橫結腸中段組織各兩塊

3、，每塊長約1cm，其中一塊組織多聚甲醛固定，包埋切片后進行HE染色、MTL免疫組織化學染色，觀察免疫反應陽性細胞數(shù)量及形態(tài)變化。另一塊組織稱重，勻漿，應用熒光分光光度法測量血漿及組織勻漿中MTL含量。 4、半定量分析：根據(jù)MTL免疫反應陽性細胞的分布密度及活動性強弱，做相對半定量比較。所有視野未見陽性細胞為(-)；有少數(shù)陽性細胞為(+)，染色為淡黃色；陽性細胞較多見為(++)，染色為棕黃色；陽性細胞多見為(+++)，染色為棕褐色

4、。 5、圖像分析：在CMIAS系列多功能病理圖像分析系統(tǒng)下，每組選5例染色良好的切片，在顯微鏡物鏡放大10倍下觀察，每張切片隨機選取5個視野，共25個視野攝入計算機(分辨率為800×600)，測量每個視野陽性染色區(qū)域的表面積密度，即面密度。最后計算每組的平均值。并用尼康光鏡照相機拍攝典型視野。 6、統(tǒng)計分析：本實驗計數(shù)資料數(shù)據(jù)采用X±s表示，應用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，選用成組t檢驗進行統(tǒng)計分析，檢驗水準a=0.05。

5、半定量分析結果采用Excel編程統(tǒng)計，檢驗方法選用成組設計多個樣本比較的秩和檢驗(Kruskal-Wallis法)，檢驗水準a=0.05。 結果： 1、腸道大體病理變化及HE染色：兩組大鼠腸道外觀無明顯差別，結腸粘膜無色素沉著。對照組大鼠腸道切片HE染色未發(fā)現(xiàn)病變，實驗組大鼠腸道切片HE染色可見粘膜慢性炎癥改變。 2、MTL免疫組織化學結果：腸道的MTL免疫組織化學染色顯示其陽性產物呈棕黃色沉淀。十二指腸、回腸粘

6、膜及粘膜下層可見MTL免疫反應陽性細胞分布，MTL免疫反應陽性細胞呈圓形，著色淡。實驗組及對照組十二指腸肌層及肌間神經叢、回腸肌層及肌間神經叢以及橫結腸全層未見陽性細胞及陽性纖維。實驗組十二指腸MTL免疫反應性較對照組明顯降低(p<0.05)；實驗組回腸MTL免疫反應性較對照組明顯降低(P<0.05)。對MTL免疫組織化學圖像分析的結果與半定量分析一致。 3、血漿中MTL含量：實驗組大鼠血漿中MTL含量較對照組降低(p<0.05

7、)。 4、腸道組織勻漿中MTL含量：實驗組及對照組大鼠十二指腸組織勻漿中MTL含量均高于同組回腸組織勻漿中MTL 含量(p<0.05)；實驗組大鼠十二指腸組織勻漿中MTL含量較對照組十二指腸組織勻漿中MTL含量降低(p<0.05)，實驗組大鼠回腸組織勻漿中MTL含量較對照組回腸組織勻漿中MTL含量降低(p<0.05)；實驗組及對照組大鼠橫結腸組織勻漿中MTL均未測出。 結論： 1、應用大黃灌胃制造STC大鼠模型