血清藥理學方法研究復方黃黛片對K562細胞凋亡的影響.pdf

1、目的:通過更接近真實體內給藥環(huán)境的血清藥理學方法證明復方黃黛片能夠通過誘導細胞凋亡途徑治療慢性粒細胞白血病，為復方黃黛片拓展應用新的適應癥提供理論依據。
　　方法:清潔級SD大鼠為研究對象，復方黃黛片混懸劑連續(xù)灌胃7天，每天1次。腹主動脈取血，電感耦合等離子質譜儀(ICP-MS)檢測血清中砷濃度。血清藥物濃度以砷含量計。5μg/ml含藥血清作用于白血病K562細胞，24h后觀察細胞給藥前后形態(tài)學變化。運用CCK-8方法檢測不同濃度

2、含藥血清(0μg/ml，2.5μg/ml,5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml,60μg/ml)給藥后12h,24h,48h對白血病K562細胞的增殖抑制作用。Calcein-AM/PI熒光染色、AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測不同濃度含藥血清(0μg/ml，5μg/ml，10μg/ml，20μg/ml)對K562細胞凋亡的影響;Western-Blot檢測凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2、Caspase

3、-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9、Cleaved Caspase-9在不同濃度含藥血清（0μg/ml，5μg/ml，10μg/ml，20μg/ml）作用后的含量表達情況。
　　結果:復方黃黛片含藥血清中含砷濃度為1.532μmol/l。給藥24h后，K562細胞邊緣模糊不清，細胞皺縮變小，中心出現破碎的物質，數量明顯變少。CCK-8實驗結果表明，不同濃度含藥血清2.5μg/ml，5μg/ml，10μg/

4、ml，20μg/ml，40μg/ml，60μg/ml作用12h后對細胞增殖的抑制率分別為1.39％、3.43％、9.43％、15.72％、30.73％、50.34％;作用24h后對細胞增殖的抑制率分別為4.33％，1072％，36.24％，60.58％，71.73％，80.43％;作用48h后，對細胞增殖的抑制率分別為9.76％，14.11％，48.72％，81.04％，88.65％，89.67％。Calcein-AM/PI熒光染色觀察

5、可見，隨血清濃度增加，正常細胞數量明顯減少，死亡細胞數量顯著增加。AnnexinⅤ-FITC/PI雙染色法測得不同給藥濃度為0μg/ml，5μg/ml，10μg/ml，20μg/ml時，凋亡率分別為0.9％，11.6％，31.5％，64.3％。含藥血清組與對照組相比，凋亡相關蛋白表達均有改變，凋亡標志性蛋白Cleaved Caspase-3，Cleaved Caspase-9及Bax表達增加，Bcl-2，Caspase-3，Caspas