寬體金線蛭中胰蛋白酶抑制劑的純化及多肽鋅的制備與性質研究.pdf

1、寬體金線蛭是列入國家藥典的藥用動物，其組織中含有超過200種的多肽或蛋白質，其中一些多肽或蛋白質具有藥物價值和生物活性，如水蛭素對凝血酶就具有很強的抑制作用。另外，寬體金線蛭中除了蛋白酶抑制劑外，其組織還含有豐富的蛋白質，這些蛋白可以作為制備多肽金屬離子螯合物理想的蛋白源，從而避免提煉完藥用成分后的寬體金線蛭作為藥渣丟棄處理，造成蛋白質的浪費。本研究以寬體金線蛭作為研究材料，利用各種生物分離技術方法，從其皮膚粘液中逐步分離純化出一種對胰

2、蛋白酶具有抑制作用的抑制劑，并對其穩(wěn)定性進行了研究；同時利用寬體金線蛭組織作為蛋白源制備出了一種具有抗菌活性的多肽鋅螯合物，并對其制備工藝和結構進行了深入的研究。本研究主要內容及結果如下：
　　1.依次通過Sephadex G-50凝膠層析、DEAE陰離子交換層析、Resource15反相色譜層析技術，從寬體金線蛭皮膚粘液中分離純化出一個分子量約為36.6KD的蛋白質，將其命名為WTI。通過測試，發(fā)現WTI不僅對胰蛋白酶具有較強的

3、抑制活性還具有較好的酸堿和熱穩(wěn)定性。
　　2.以寬體金線蛭組織為蛋白源，用木瓜蛋白酶和風味蛋白酶組成的復合酶對寬體金線蛭組織進行酶解，然后將酶解得到的多肽與硫酸鋅在不同條件下進行反應，經過硫化鈉法定性分析鑒定出反應產物為一種多肽鋅螯合物。隨后對其進行抑菌活性的檢測發(fā)現寬體金線蛭多肽鋅螯合物對濃度為105cfu/mL的大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的抑菌圈分別達到22mm和13mm。
　　3.對制備的多肽鋅螯合物和原料多肽進行紫外、紅