E-鈣粘蛋白在內(nèi)皮祖細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞之間的粘附作用及機制研究.pdf

1、目的：探討E-鈣粘蛋白(E-cadherin, E-cad)在內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial progenitor cells, EPCs)和間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)之間的粘附作用及機制。
　　方法：
　　1.體外C57BL/6J(WT)小鼠骨髓腔分離培養(yǎng)EPCs和MSCs。
　　2.使用Mito Tracker Red標(biāo)記EPCs，DAPI標(biāo)記MSC。
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2、.采用免疫熒光的方法觀察E-cad在細(xì)胞內(nèi)的表達情況。
　　4.細(xì)胞粘附實驗觀察EPCs與MSCs體外粘附現(xiàn)象。
　　5.使用E-cad Si-RNA干擾EPCs和MSCs中E-cad的表達。
　　6. RT-PCR和Western-blot檢測Si-RNA轉(zhuǎn)染效率。
　　7.轉(zhuǎn)染成功后在成血管的凝膠上進一步檢測二者粘附現(xiàn)象。
　　8. ELISA檢測 E-cadherin的表達。
　　9. RT-P

3、CR和Western-blot檢測MSCs和EPCs相互作用后E-cad/β-catenin的mRNA和蛋白表達。
　　10. MSCs和EPCs分別加入β-catenin特異性抑制劑XAV939后，在成血管的凝膠上進一步檢測二者粘附現(xiàn)象。
　　結(jié)果：
　　1.體外共培養(yǎng)MSCs和EPCs，E-cad的表達顯著上調(diào)。
　　2. E-cad Si-RNA成功轉(zhuǎn)染MSCs和EPCs，E-cad mRNA和E-cad蛋

4、白的表達顯著下調(diào)。
　　3. Si-RNA成功轉(zhuǎn)染MSCs和EPCs后，二者粘附現(xiàn)象明顯受到抑制。
　　4.沉默EPCs和MSCs的E-cad后，二者在成血管凝膠上的粘附及成管現(xiàn)象均受到顯著抑制。
　　5. MSCs和EPCs均能分泌E-鈣粘蛋白。
　　6. EPCs分泌的E-cad通過上調(diào)MSCs的β-catenin來調(diào)節(jié)二者共粘附。
　　7.β-catenin信號通路調(diào)控MSCs和EPCs的粘附。