二甲氧芐啶對Wistar大鼠的毒理學(xué)研究.pdf

1、甲氧芐啶類化合物是一類具有抗菌增效作用的藥物,二甲氧芐啶(Diaveridine,DVD)是其中具有代表性的一種藥物。由于二甲氧芐啶上市的年代比較久遠(yuǎn),缺少毒理學(xué)和藥理學(xué)的相關(guān)資料,并且評價(jià)體系與現(xiàn)在不同,所以為了評價(jià)二甲氧芐啶的安全性,需要對其進(jìn)行系統(tǒng)的毒理學(xué)試驗(yàn),包括二甲氧芐啶的急性毒性、亞慢性毒性、繁殖和喂養(yǎng)致畸試驗(yàn)。并以此為基礎(chǔ)計(jì)算每日容許攝入量(ADI)和安全濃度(SC),為二甲氧芐啶的臨床使用提供基本的毒理學(xué)評價(jià)依據(jù)。

2、>　　 1急性毒性試驗(yàn)
　　 選用SPF級Wistar大鼠雌雄各16只,采用Up-and-Down(UDP)法進(jìn)行試驗(yàn)。二甲氧芐啶用0.25％的羧甲基纖維素鈉(CMC)助溶制成混懸液,一次性灌胃染毒,觀察14天內(nèi)的中毒反應(yīng),根據(jù)統(tǒng)計(jì)分析軟件AOT425 Stat Pgm計(jì)算半數(shù)致死量和95％的可信限。試驗(yàn)得出雌性Wistar大鼠的LD50為2330 mg/kg b.w.,95％可信限為1798到4540 mg/kg b.w.；

3、雄性Wistar大鼠的LD50為3100 mg/kg b.w.,95％可信限為2311到4080 mg/kg b.w.。按照急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)確定二甲氧芐啶為低毒性物質(zhì)。
　　 290天喂養(yǎng)試驗(yàn)
　　 選用SPF級Wistar大鼠170只,按體重隨機(jī)分為5組飼喂13周?？瞻讓φ战M飼喂不添加藥物的空白飼料；其余4組劑量分別為二甲氧芐啶(DVD)23、230、1150、2000 mg/kg飼料?？瞻讓φ战M和二甲氧芐啶2000

4、mg/kg飼料組每組雌雄各20只Wistar大鼠；二甲氧芐啶23、230、1150 mg/kg飼料組每組雌雄各15只Wistar大鼠,雌雄分籠飼養(yǎng),飼養(yǎng)條件嚴(yán)格按照國際動物福利規(guī)定。各周稱量大鼠體重及攝食量,計(jì)算飼料利用率。在試驗(yàn)中期各組宰殺雌雄大鼠各5只,試驗(yàn)?zāi)┢诟鹘M宰殺雌雄大鼠各10只?？瞻讓φ战M和二甲氧芐啶2000 mg/kg飼料組余下的雌雄大鼠飼喂基礎(chǔ)飼料2周后安樂處死。取全血及血清進(jìn)行血液學(xué)指標(biāo)檢驗(yàn),尸體剖檢和病理組織學(xué)檢查。

5、對主要臟器絕對重量和相對重量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較分析。大鼠在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi),二甲氧芐啶23 mg/kg飼料組體重增長、飼料消耗量、飼料利用率、血常規(guī)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)、器官相對重量和病理檢查與空白相比均無顯著差異(p>0.05)。二甲氧芐啶1150和2000 mg/kg飼料組生化指標(biāo)與空白組相比ALP和K+出現(xiàn)具有病理學(xué)意義的升高。組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)肝臟僅中央靜脈部分出現(xiàn)炎性淋巴細(xì)胞浸潤,腎臟皮質(zhì)和髓質(zhì)部分均出現(xiàn)異常病變,腎上腺皮質(zhì)部分出現(xiàn)水泡

6、樣病變。二甲氧芐啶230mg/kg飼料組從喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的第3周開始大鼠的平均體重極顯著低于空白對照組(p<0.01)；二甲氧芐啶1150 mg/kg和2000 mg/kg飼料組的大鼠從喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的第1周開始平均體重極顯著低于空白對照組(p<0.01),這個(gè)趨勢一直保持到試驗(yàn)結(jié)束。二甲氧芐啶1150和2000 mg/kg飼料組雌性大鼠肝臟、腎臟和大腦相對重量顯著大于空白對照組；雄性大鼠的腎、睪丸(帶附睪)和大腦的相對重量顯著大于空白對照組,血常

7、規(guī)和其它生化指標(biāo)均沒有異常變化。組織病理學(xué)觀察表明,二甲氧芐啶對Wistar大鼠亞慢性毒性作用的靶器官為腎臟。二甲氧芐啶亞慢性最大未觀察到有害作用劑量(NOAEL)為23 mg/kg飼料。
　　 3二代繁殖試驗(yàn)
　　 選用健康非經(jīng)產(chǎn)SPF級Wistar大鼠215只,按體重隨機(jī)分為5組,在試驗(yàn)開始(F0代)時(shí)雌鼠每組各25只,雄性每組各18只(以保證每組20只受孕雌鼠)；在繼續(xù)試驗(yàn)(F1代)中雌鼠每組各30只,雄性20只。

8、設(shè)空白對照組和二甲氧芐啶試驗(yàn)組,劑量為二甲氧芐啶23、230、1150、2000 mg/kg飼料。各劑量組飼喂13周后進(jìn)行交配。試驗(yàn)期間統(tǒng)計(jì)分析母代及子代大鼠的體重、攝食量、繁殖指數(shù)等指標(biāo),對大鼠生殖系統(tǒng)進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。二甲氧芐啶1150、2000 mg/kg飼料組F0代和F1代胎鼠體重和飼料利用率顯著性低于空白對照組；孕鼠增重、窩平均活仔數(shù)和第0、4、7、14、21天平均仔重極顯著低于空白對照組(p<0.01)。雄鼠生殖器官病理學(xué)

9、各劑量組檢查均正常,但是最高劑量組部分F1代雌鼠子宮壁出現(xiàn)萎縮、子宮腔縮小以及出現(xiàn)子宮腫瘤。二甲氧芐啶對大鼠生殖發(fā)育毒性的NOAEL為23 mg/kg飼料。
　　 4喂養(yǎng)致畸試驗(yàn)
　　 喂養(yǎng)致畸試驗(yàn)與二代繁殖試驗(yàn)F1代聯(lián)合進(jìn)行,將大鼠按隨機(jī)分為5組,每組各30只雌鼠,20只雄鼠。設(shè)空白對照組和二甲氧芐啶試驗(yàn)組,劑量為二甲氧芐啶23、230、1150、2000 mg/kg飼料。各組均以設(shè)定劑量連續(xù)飼喂13周后交配,在妊娠第

10、20天時(shí)進(jìn)行剖腹檢查畸胎。試驗(yàn)結(jié)果顯示二甲氧芐啶1150和2000 mg/kg飼料組孕鼠增重、窩平均活仔數(shù)和第0、4、7、14、21天平均仔重極顯著低于空白對照組(p<0.01)。各組均未出現(xiàn)明顯的與藥物相關(guān)的外觀和內(nèi)臟畸形。二甲氧芐啶致畸試驗(yàn)NOAEL為23 mg/kg飼料。
　　 5計(jì)算每日容許攝入量(ADI)及安全濃度(SC)
　　 根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果綜合比較確定DVD的NOAEL為23 mg/kg飼料,按照FDA給

11、出的ADI(acceptable daily intake)和SC(safe concentration)計(jì)算公式,計(jì)算得出二甲氧芐啶的每日容許攝入量(ADI)為0.0023 mg/kg b.w.,在肌肉、肝臟、腎臟、脂肪中的安全濃度(SC)分別為0.46、1.38、2.76、2.76 mg/kg。
　　 所有試驗(yàn)條件、設(shè)計(jì)與步驟均符合美國食品藥品管理局(FDA)頒布的毒理學(xué)安全性評價(jià)原則、經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(OECD)毒理學(xué)實(shí)