大豆異黃酮干預(yù)肥胖大鼠睪酮合成與分泌相關(guān)因子的研究.pdf

1、觀察高脂飲食肥胖大鼠及大豆異黃酮（Soybean isoflavones，SIF）干預(yù)后其睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)、睪酮含量及睪酮合成與分泌關(guān)鍵因子的變化，為完善SIF調(diào)控雄性生殖系統(tǒng)生物學(xué)功能提供科學(xué)的臨床實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　高脂飲食誘導(dǎo)9周建立大鼠肥胖模型，以高脂組（n=60）大鼠體重超過基礎(chǔ)組大鼠體重的1.4倍標(biāo)準(zhǔn)差，血脂水平及肝臟脂滴含量顯著差異為判斷標(biāo)準(zhǔn)。成模后從高脂組中篩選20只肥群大鼠，并在基礎(chǔ)組篩選5只大鼠進(jìn)行SIF干預(yù)實(shí)驗(yàn)，為期

2、4周，按SIF劑量梯度把20只高脂組大鼠隨機(jī)分為高脂對照組（Ⅰ:0.5％羧甲基纖維素鈉，n=5）、低劑量組(Ⅱ:50mg/kg·BW，n=5)、中劑量組(Ⅲ:150 mg/kg· BW，n=5)、高劑量組（Ⅳ:450mg/kg·BW，n=5）和基礎(chǔ)對照組(Ⅴ:0.5％羧甲基纖維素鈉2ml/kg·BW，n=5)，飼養(yǎng)同建模期。運(yùn)用油紅O染色法觀察肝臟脂滴的分布及含量;HE觀察大鼠肝臟和睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu);ELISA測定睪丸組織中睪酮含量;SAB

3、C免疫組化和RT-PCR法檢測睪酮生物合成與分泌關(guān)鍵因子StAR、P450scc、P450c17、3β-HSD、17β-HSD、ANXA5的蛋白及mRNA表達(dá)水平。
　　1.建模期高脂組大鼠體重和血脂水平明顯高于基礎(chǔ)組大鼠，由以TC、TG、LDL-C差異最為顯著(P＜0.01);干預(yù)期SIF對肥胖大鼠體重有明顯的減重作用，并呈時間、劑量依賴性。SIF能顯著降低肥胖大鼠的血脂水平，高劑量水平暴露下作用最為明顯，各組間比較差異顯著(P

4、＜0.05)。其中，基礎(chǔ)組大鼠的血脂在干預(yù)期始終處于較穩(wěn)定狀態(tài)。高脂對照組大鼠的各血脂指標(biāo)在于預(yù)期間均處于穩(wěn)定的高水平狀態(tài)（P＜0.05）。不同劑量SIF對各血脂指標(biāo)影響不同，表現(xiàn)為低劑量作用下TC、TG、HDL-C均先增高后降低，而LDL-C先降低后升高，但均高于基礎(chǔ)組水平(P＜0.05)。中劑量組TC、TG水平先升高后降低，HDL-C、LDL-C先降低后升高最后均趨于正常水平。高劑量作用下大鼠的TC、TG、HDL-C水平顯著降低，但

5、TG、LDL-C均高于基礎(chǔ)組水平(P＜0.05)，TC、HDL-C顯著低于基礎(chǔ)組(P＜0.05)。油紅O染色顯示，高脂對照組大鼠肝臟內(nèi)有大量脂滴均勻堆積，而SIF干預(yù)各組大鼠肝臟內(nèi)的脂滴隨SIF劑量增加，其清除范圍由中央靜脈向周圍擴(kuò)散性放大，并呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性。
　　2.HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)高脂對照組大鼠睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，生精小管上皮細(xì)胞脫落變薄，小管內(nèi)細(xì)胞層數(shù)顯著減少，精原細(xì)胞數(shù)量顯著減少(P＜0.05)，排列稀疏，少量生精

6、小管萎縮。且小管間間質(zhì)排列松散，間質(zhì)明顯變薄且間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量變少，間質(zhì)中血管充血。SIF各實(shí)驗(yàn)組肥胖大鼠睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，與高脂對照組比較均有明顯的恢復(fù)，不同分化程度生精細(xì)胞數(shù)量增多，小管和小管內(nèi)細(xì)胞排列緊密，尤以中、高劑量組恢復(fù)較好，低劑量組大鼠睪丸內(nèi)生精小管排列相對松散，較中、高劑量組其他明顯差別。大鼠肝臟HE染色結(jié)果顯示，高脂對照組大鼠肝臟細(xì)胞腫脹且部分肝細(xì)胞脂肪變性、壞死，可見炎性細(xì)胞增多，含鐵血紅素增多。SIF各實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟結(jié)

7、構(gòu)較高脂對照組也有明顯的恢復(fù)，中劑量維大鼠肝臟幾乎完全恢復(fù)為正常結(jié)構(gòu)，而低、高劑量組大鼠肝臟內(nèi)的血管壁上可見大量炎性細(xì)胞，組織內(nèi)也呈散在分布，可見少量肝細(xì)胞壞死。
　　3.ELISA撿測各組大鼠睪酮含量，發(fā)現(xiàn)高脂對照組和SIF低劑量組大鼠睪丸內(nèi)睪酮含量最低，基礎(chǔ)組和中劑量組大鼠睪酮含量最高，高劑量組睪酮含量居中。結(jié)果顯示大鼠肥胖導(dǎo)致體內(nèi)睪酮含量顯著降低，SIF中、高劑量下能明顯促進(jìn)大鼠睪丸睪酮的合成與分泌，且中劑量組強(qiáng)于高劑量組，

8、各組間比較差異顯著(P＜0.05)。
　　4.免疫組化SABC結(jié)果:P450scc、P450c17、3β-HSD、17β-HSD、ANXA5、StAR主要在睪丸間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)和精原細(xì)胞胞質(zhì)中表達(dá)，其中以StAR、P450scc的表達(dá)量最多，SIF能明顯改善肥胖所致的睪酮合成關(guān)鍵因子表達(dá)量下降。除ANXA5外各因子、各組間的表達(dá)趨勢一致:高脂對照組表達(dá)量最少，基礎(chǔ)組和中劑量組表達(dá)最多，在低、中劑量組表達(dá)量隨SIF劑量升高而增加，高劑量

9、組陽性表達(dá)水平低于中劑量組，各組間差異顯著(P＜0.05)。ANXA5在睪丸內(nèi)的表達(dá)與上述各關(guān)鍵因子不同，基礎(chǔ)組大鼠表達(dá)量最高，高脂對照組最少，SIF各劑量組ANXA5表達(dá)量均比高脂對照組多，并呈現(xiàn)顯著的劑量依賴性，各劑量組間差異顯著(P＜0.05)。RT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)上述因子MRNA的表達(dá)與免疫組化SABC的結(jié)果相似，說明在分子水平與蛋白質(zhì)水平上，SIF對高脂飲食肥胖大鼠睪酮合成與分泌關(guān)鍵酶的調(diào)控是一致的。對各關(guān)鍵因子mRNA相對表

10、達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)P450scc、P450c17、3β-HSD、17β-HSD、StAR之間相互聯(lián)系緊密(P＜0.05)，ANXA5與其他因子之間沒有明顯的相關(guān)性。
　　結(jié)果表明短期高脂飲食喂養(yǎng)可成功建立穩(wěn)定的肥胖大鼠模型，在補(bǔ)充不同劑量SIF后能劑量依賴性的減脂減重。高脂飲食誘導(dǎo)下可對大鼠生殖系統(tǒng)造成可逆的影響，且在SIF中劑量組作用更明顯。SIF可上調(diào)參與睪酮合成的各關(guān)鍵因子P450scc、P450c17、3β-HSD、1