補體C5a在細菌感染性炎癥中對IL-8分泌的調(diào)節(jié)研究.pdf

1、感染性炎癥是由于機體組織損傷，致病菌入侵致使機體在局部或全身范圍表現(xiàn)出的綜合性非特異防御應答。感染性炎癥的持續(xù)發(fā)展可使得機體免疫系統(tǒng)失控，使其病原菌在體內(nèi)迅速繁殖并產(chǎn)生大量毒素，誘發(fā)免疫系統(tǒng)進入無能狀態(tài)并加重組織器官的損傷，由此而產(chǎn)生敗血癥。敗血癥的致死率較高，在西方發(fā)達國家，大約每年有一百五十萬人患病，死亡率達30％-50％。
　　 補體(complement，C)是由30余種廣泛存在于血清、組織液和細胞膜表面的蛋白質(zhì)組成的，

2、具有精密調(diào)控機制的蛋白質(zhì)反應系統(tǒng)，其活化過程表現(xiàn)為一系列絲氨酸蛋白酶的級聯(lián)酶解反應。補體系統(tǒng)參與機體的特異性和非特異性免疫機制，表現(xiàn)為抗微生物防御反應，免疫調(diào)節(jié)及介導免疫病理的損傷性反應，是機體應答入侵微生物和感染介質(zhì)的第一道防線。
　　 在補體激活產(chǎn)物中C5a是一種具有廣泛生物活性的趨化因子，如參與趨化中性粒細胞；介導吞噬性細胞顆粒酶的釋放；調(diào)節(jié)細胞因子的分泌如IL-6；擴張血管等。而過度活化的補體C5a能夠?qū)е卵装Y反應的過度

3、放大，導致天然免疫系統(tǒng)的失調(diào)，例如中性粒細胞的無功能；血小板激活；直接或間接的微血管損傷。研究證明在實驗性敗血癥中阻斷C5a或者是C5a受體(C5aR/CD88)對生存率的改善是有積極意義的。
　　 IL-8是一種具有很強趨化活性的細胞因子，能夠促進中性粒細胞的活化和脫顆粒。由于對中性粒細胞很強的趨化活性，IL-8被認為在敗血癥的致病過程中發(fā)揮了重要作用。Hack等證明在敗血癥病人的血清中IL-8有明顯的升高。IL-8由許多細胞

4、產(chǎn)生，包括血液中的單核細胞，巨噬細胞和內(nèi)皮細胞。在疾病的進展過程中IL-8可能通過趨化過量的中性粒細胞達到炎癥部位而引起組織損傷。在動物的敗血癥模型上阻斷小鼠IL-8(也稱為KC，角質(zhì)化細胞來源的細胞因子)之后可以顯著提高早期的生存率。基于IL-8在感染性炎性疾病中的重要作用，深入探討其表達調(diào)節(jié)機制對于及時防治感染性疾病的進展有著重要意義。
　　 感染性炎癥過程中補體C5a發(fā)揮病理效應的機制之一是誘導其它炎癥介質(zhì)的大量釋放。研究

5、數(shù)據(jù)顯示補體C5a在炎癥細胞因子IL-6、IL-17、TNFα的調(diào)節(jié)中發(fā)揮了重要作用。過度活化的C5a在感染性炎癥中對IL-8釋放的調(diào)節(jié)作用和及調(diào)節(jié)途徑、方式是本研究課題所關(guān)注的內(nèi)容。
　　 為了回答上述問題，本研究用模擬感染的體外實驗和敗血癥小鼠模型的體內(nèi)實驗探討了在感染性炎癥中補體C5a對IL-8的調(diào)節(jié)作用和方式，為深入認識感染性炎癥下C5a的作用機理，及其與IL-8表達調(diào)節(jié)的關(guān)系提供了新的實驗依據(jù)。
　　 本研究共

6、分為四個部分：
　　 (1)外源性C5a協(xié)同LPS刺激IL-8產(chǎn)生的效應及機制研究
　　 (2)外源性C5a協(xié)同TLR激動劑誘導IL-8產(chǎn)生的效應研究
　　 (3)體外感染模型中內(nèi)源性人C5a促進IL-8產(chǎn)生的效應及機制
　　 (4)敗血癥模型中過度活化的C5a對小鼠IL-8表達的調(diào)節(jié)效應
　　 在體外實驗中我們發(fā)現(xiàn)C5a能夠協(xié)同增強LPS和其它的Toll樣受體激動劑刺激全血產(chǎn)生IL-8，MAPK

7、s途徑中的ERK和p38被證明在這個過程中發(fā)揮了重要作用。大腸桿菌K12體外刺激人全血后C5a和IL-8的含量明顯升高，而且在C5a被單抗阻斷之后IL-8的水平明顯下調(diào)。
　　 體內(nèi)實驗中，我們采用了經(jīng)典的敗血癥動物模型CLP(盲腸結(jié)扎穿孔)。在CLP手術(shù)組我們發(fā)現(xiàn)小鼠IL-8(KC)在mRNA水平上明顯上調(diào)，在用抗體中和C5a之后KC表達水平明顯下降。
　　 以上研究結(jié)果提示作為炎性因子的IL-8在感染性炎癥的免疫應答