豬UBXNI基因啟動(dòng)子區(qū)突變鑒定及其與系水力相關(guān)性的研究.pdf

1、肌肉細(xì)胞的形態(tài)與結(jié)構(gòu)主要是由細(xì)胞骨架維持，對(duì)系水力的維持有著相當(dāng)重要的作用。RhoA(Ras同源蛋白家族成員A)基因可以通過(guò)RhoA-ROCK信號(hào)途徑影響應(yīng)力纖維的形成過(guò)程和維持其穩(wěn)態(tài)，影響肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重組，使得細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，蛋白結(jié)合水平升高，促進(jìn)骨架蛋白收縮，對(duì)系水力(water holdingcapacity，WHC)具有潛在調(diào)節(jié)作用。另外有研究表明，UBXN1(UBX結(jié)構(gòu)域包含蛋白1)作為一種泛素修飾調(diào)控蛋白，可以通過(guò)促進(jìn)

2、肌纖維蛋白質(zhì)的降解進(jìn)而影響到系水力。UBXN1除了包含一個(gè)UBA結(jié)構(gòu)域以外，其C端還包含一個(gè)UBX結(jié)構(gòu)域，此結(jié)構(gòu)域與泛素具有一定的同源相似性，它可以與泛素鏈結(jié)合，參與介導(dǎo)泛素蛋白酶體途徑，從而可以調(diào)節(jié)肌纖維蛋白質(zhì)的降解。肌纖維蛋白的降解一方面可以減少胴體屠宰后肌肉細(xì)胞的收縮，防止過(guò)多的水分流失，另一方面降解的蛋白提供了水分儲(chǔ)存的空間，對(duì)于系水力水平都有提高。因此本實(shí)驗(yàn)將RhoA和UBXN1作為候選基因，研究這兩個(gè)基因啟動(dòng)子區(qū)域的單核苷酸

3、多態(tài)性(Singlenucleotide polymorphism，SNP)對(duì)基因表達(dá)水平以及肌肉系水力水平的影響。
　　本實(shí)驗(yàn)首先選取高低組WHC樣品各16個(gè)，用熒光定量PCR檢測(cè)兩個(gè)候選基因在系水力高低組中的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)基因在系水力高低組的表達(dá)水平均有差異。再將高低組樣品分別進(jìn)行DNA混池，將RhoA基因和UBXN1基因啟動(dòng)子區(qū)2000bp序列測(cè)序，進(jìn)行高低組序列對(duì)比。結(jié)果在UBXN1基因啟動(dòng)子區(qū)得到了在WHC高組和低組

4、中等位基因分布模式有差異的SNP位點(diǎn)c.-379T＞G。采用PCR-SSCP技術(shù)對(duì)170頭杜長(zhǎng)大三元雜交豬的c.-379T＞G位點(diǎn)進(jìn)行大群基因分型，經(jīng)過(guò)性狀關(guān)聯(lián)分析后發(fā)現(xiàn)TT型的系水力顯著高于GG型(p＜0.01)，隨后對(duì)兩組基因型各9個(gè)個(gè)體的UBXN1表達(dá)水平進(jìn)行定量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TT基因型的UBXN1基因表達(dá)水平顯著高于GG型(p＜0.05)。
　　用雙熒光素酶活性分析兩種不同基因型的啟動(dòng)子活性差異，報(bào)告結(jié)果顯示TT型啟動(dòng)子活