根霉轉化坎利酮中試工藝條件研究.pdf

1、11α-羥基坎利酮是坎利酮羥基化反應后形成的甾體類衍生物，也是合成依普利酮的重要藥物中間體。在由甾體化合物坎利酮半化學合成依普利酮的過程中，坎利酮經(jīng)微生物轉化11α-羥基化是首要步驟，也是最關鍵的步驟之一。微生物轉化坎利酮合成11α-羥基坎利酮的方法具有反應條件溫和、特異性強、產率高、副產物少等特點，能克服化學合成法的不足。
　　 本課題主要對坎利酮經(jīng)根霉轉化制備11α-羥基坎利酮的中試工藝條件進行了研究。首先對轉化的坎利酮衍生

2、產物進行了結構鑒定，以確定衍生產物為11α-羥基坎利酮;然后在10L發(fā)酵罐上對根霉轉化坎利酮的工藝條件進行了研究;并且對根霉菌體對坎利酮的作用機制進行了初步探索。主要結果如下:
　　 1.首先用乙酸乙酯對根霉轉化后的坎利酮衍生產物進行提取，然后通過重結晶法和中壓硅膠柱層析法對其進行了純化，得到純度為99.5％的坎利酮衍生產物。
　　 2.采用紫外光譜檢測坎利酮及其衍生產物，測得其最大吸收波長分別為272nm和271nm;

3、然后對坎利酮及衍生物進行紅外光譜檢測，紅外光譜譜圖中衍生產物較坎利酮多出3431.78cm-1的吸收峰，說明衍生產物分子中有羥基存在;再通過高效液相色譜檢測坎利酮和衍生產物，二者的保留時間分別為9.216min和6.604min;通過高效液相色譜-質譜聯(lián)用，測定出底物的分子量340.4，產物的分子量為356.4，衍生產物比坎利酮分子量大16;最后通過核磁共振圖譜13C譜確定衍生產物羥基化的位置是在C11位，核磁共振圖譜1H譜進一步確定羥

4、基在11-α位。說明坎利酮經(jīng)過根霉轉化后的衍生產物即為11α-羥基坎利酮。
　　 3.對根霉轉化坎利酮進行了10L發(fā)酵罐放大工藝研究。首先對接種量進行單因子條件優(yōu)化，結果表明在4％的接種量時轉化率最高。然后在4％接種量條件下，通過L16(44)的正交試驗，對根霉中試轉化條件進行了優(yōu)化，得到其最優(yōu)條件為:pH7.0、溫度34℃、轉速100r/min、通氣量0.6v/v/m;從極差可以看出，四個因素中通氣量對轉化率的影響最大，其次為