TLR7基因拷貝數變異與漢族系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的相關性研究.pdf

1、背景和目的：
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemiclupuserythematousus，SLE）是一種表現(xiàn)為多種自身抗體生成，免疫復合物沉積，導致全身多器官臟器損害的自身免疫性疾病。SLE目前發(fā)病機制不十分明確，大多數學者認為是由遺傳、感染、性激素、環(huán)境等因素相互作用引起機體免疫調節(jié)紊亂所導致的自身免疫性疾病。發(fā)病率和患病率在不同種族及地區(qū)有著很大的差異，不同地區(qū)及人種SLE患者的臨床表型也存在差異，亞洲人群比歐洲人群更常見

2、腎臟受累。這提示了遺傳因素在SLE發(fā)病及臨床表型的復雜性方面起了作用。SLE所具有的家族聚集現(xiàn)象是遺傳因素參與的重要證據，約有11％-12％的患者一級親屬也患有系統(tǒng)性紅斑狼瘡。同時家系雙生子研究也提示單卵雙生患病比例(24％-65％)高于異卵雙生比例(2％-9％)，雙胞胎的患病風險是正常人的8-29倍。
　　 隨著遺傳學的進步，研究方法的更新，學者們用全基因組關聯(lián)分析單核苷酸多態(tài)性(SNP-GAWS)方法對SLE家系進行研究，發(fā)

3、現(xiàn)了一些有價值的易感基因。通過SNP-GWAS人們只能解釋相對一小部分疾病風險，不同于SNP，基因拷貝數變異(copynumbervariations，CNVs)也是遺傳多樣性的一種主要表現(xiàn)，并且是人類基因變異的重要遺傳基礎。隨著人類基因組計劃的完成，目前發(fā)現(xiàn)了多個SLE的易感基因和位點，shen等在亞洲人群4334例狼瘡患者和4940例健康對照的TLR7區(qū)域基因進行了多態(tài)性研究，發(fā)現(xiàn)了TLR7SNP(rs3853839)與SLE易感性

4、相關。還有學著研究發(fā)現(xiàn)ETS1和WDFY4基因、TNIP1和PRDM1基因等基因多態(tài)性與SLE的易感性同樣具有相關性。關于基因拷貝數變異在SLE中的研究，目前已發(fā)現(xiàn)FCGR3B、C4、CCL3L1等基因的拷貝數變異與SLE有相關性。此外基因拷貝數變異與其他免疫性疾病也已廣泛研究，人們已經發(fā)現(xiàn)CNVs現(xiàn)象可以通過影響免疫系統(tǒng)的基因來增加人類自身免疫性疾病的易感性。
　　 TLR7是Toll樣受體家族的一員，主要識別病毒單鏈RNA，

5、同時也識別人工合成的一些抗病毒分子如Imiquimod、R848、Loxoribine等，通過MyD88信號通路促進炎癥產生，介導非特異性天然免疫應答。TLR7基因位于X染色體短臂2區(qū)2帶，動物模型的研究表明TLR7過度表達會誘導鼠狼瘡的發(fā)生，缺少TLR7的MRL/lpr鼠表現(xiàn)為抗核抗體產生減少，腎小球表現(xiàn)出低水平的免疫復合物沉積。此外，在TLR7基因拷貝數為4-23倍的轉基因小鼠中，TLR7mRNA的表達大幅度增加，導致了嚴重的炎癥反

6、應。徐薇等人研究發(fā)現(xiàn)TLR7mRNA在SLE患者活動期顯著升高，提示TLR7與SLE活動相關，而TLR7的表達異常可能與狼瘡患者的關節(jié)炎病理過程有關。
　　 目前國內外有關TLR7基因與SLE或SLE-LN的研究焦點主要集中在SNP。隨著人類基因組基因拷貝數變異圖譜的完成，基因拷貝數逐漸引起重視。目前已有一些基因拷貝數變異與系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關性的研究，呂詠梅等在中國漢族人群中研究發(fā)現(xiàn)C4基因拷貝數變異與中國漢族人群SLE易感性相

7、關，未發(fā)現(xiàn)總C4基因拷貝數與某一臨床表型相關，但C4A可能與關節(jié)炎的發(fā)生密切相關。MariamMolokhia等人在非洲人群中研究發(fā)現(xiàn)FCGR3B基因拷貝數（0或1）與歐洲人的分布具有差異，同時提示低拷貝數FCGR3B是SLE的風險因素。另有文獻報道TLR7基因拷貝數變異在系統(tǒng)性紅斑狼瘡與健康對照無明顯差異，TLR7CNVs與狼瘡患者抗體的產生也無明顯關系。Humberto等人報道TLR7基因拷貝數升高對于墨西哥兒童SLE是危險因素，也

8、證實了X連鎖基因數量與SLE的易感性相關，但與狼瘡腎炎的發(fā)生無明顯關系。
　　 目前，在亞洲人群中尚未報道TLR7基因拷貝數變異與系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其臨床表型的相關性?；谝陨戏治?，本課題組擬對中國漢族337例SLE患者及338例健康對照測定TLR7基因拷貝數，探討中國人群TLR7基因拷貝數變異與SLE遺傳易感性之間的關系;同時分析TLR7基因拷貝數變異與SLE不同臨床表型之間的關系。為探索SLE遺傳易感性提供有力的支持，從而為全

9、面認識并理解SLE遺傳學發(fā)病機制提供基礎。
　　 方法：
　　 1.2010-2012年間，從鄭州大學第一附屬醫(yī)院腎病風濕科門診及病房收集337例SLE患者的血標本。從體檢科及鄭州大學學生健康志愿者中收集338例健康對照者血標本。提取SLE患者及健康對照血標本的DNA，放于-80℃冰箱保存。
　　 2.用AccuCopyTM多重基因拷貝數檢測技術方法在337例漢族人SLE患者及338例健康對照中測定TLR7基因拷

10、貝數。
　　 3.采用病例-對照及病例-病例研究，分析TLR7基因拷貝數在健康及SLE患者之間的差異;并在SLE患者之間按臨床表型分為腎炎組、非腎炎組，血液系統(tǒng)受累組、非血液系統(tǒng)受累組，抗Sm抗體陽性組、抗Sm抗體陰性組，分析TLR7基因拷貝數與不同臨床表型之間的相關性。
　　 4.用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計，定量資料數據采用中位數和四分位數來描述，兩獨立樣本的均值比較采用非參數秩和檢驗，定性資料用率來表示，P＜0.

11、05具有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 1.中國漢族人TLR7基因拷貝數在人群中的分布:337例SLE患者中，女性SLE組TLR7基因拷貝數范圍1～3，其中1拷貝4例，2拷貝302例，3拷貝1例;男性SLE組TLR7基因拷貝數范圍1～2，其中1拷貝29例，2拷貝1例;338例健康對照組中，女性對照組TLR7基因拷貝數范圍1～2，其中1拷貝22例，2拷貝237例。男性對照組1拷貝79例。
　　 2.女性組TLR7

12、基因拷貝數在SLE組和健康對照組之間的分布無統(tǒng)計學差異（Z=-1.175，P=0.240）;男性組TLR7基因拷貝數在SLE組和健康對照組之間的分布無統(tǒng)計學差異(Z=-1.085，P=0.278)。
　　 3.女性組TLR7基因拷貝數在狼瘡腎炎組和非狼瘡腎炎組之間的分布無統(tǒng)計學差異（Z=-0.888，P=0.375）;男性組TLR7基因拷貝數在狼瘡腎炎組和非狼瘡腎炎組之間的分布無統(tǒng)計學差異（Z=-0.460，P=0.646）。<

13、br>　　 4.女性組TLR7基因拷貝數在狼瘡血液系統(tǒng)受累組和非血液系統(tǒng)受累組之間的分布無統(tǒng)計學差異（Z=-1.085，P＝0.278），男性組TLR7基因拷貝數在狼瘡血液系統(tǒng)受累和非血液系統(tǒng)受累組之間的分布無統(tǒng)計學差異(Z=-0.340，P=0.733)。
　　 5.女性組TLR7基因拷貝數在抗Sm抗體陽性組和陰性組之間的分布無統(tǒng)計學差異(Z=-0.529，P=0.597)。男性組TLR7基因拷貝數在抗Sm抗體陽性組和陰性組

14、之間的分布無統(tǒng)計學差異(Z=-0.158，P=0.874)。
　　 結論：
　　 1.中國漢族人TLR7基因拷貝數在人群中的分布:女性SLE組TLR7基因拷貝數中位數(P25～P75)為2.00(0.11)，健康對照組為2.01(0.13)。男性SLE組TLR7基因拷貝數中位數(P25～P75)為0.98(0.08)，健康對照組為0.98(0.05)。
　　 2.TLR7基因拷貝數變異與中國漢族SLE患者的發(fā)病無