肝星狀細(xì)胞的分離與細(xì)胞損傷對(duì)成肌纖維細(xì)胞形態(tài)和極性轉(zhuǎn)變的影響.pdf

1、肝纖維化（hepatic fibrosis）是指在慢性肝病的影響下，肝臟內(nèi)彌漫性細(xì)胞外基質(zhì)（特別是膠原）的過(guò)度沉積。而慢性肝病的愈傷反應(yīng)過(guò)程中肝星狀細(xì)胞（hepaticstellate cells，HSC）扮演著十分重要的角色。在正常的肝臟中，肝星狀細(xì)胞是靜止的非肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，主要的作用是儲(chǔ)存維生素A和保持正常的基底膜成分。但是很多體內(nèi)外的實(shí)驗(yàn)都表明，一旦HSC 受到外界信號(hào)的刺激，HSC 便失去儲(chǔ)存的維生素A，變成一個(gè)快速增殖，表達(dá)Ⅰ型

2、膠原的細(xì)胞。
　　 本文在參考文獻(xiàn)和總結(jié)別人經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，取成年雄性SD大鼠，用鏈蛋白酶、膠原酶在體門(mén)靜脈灌注肝臟消化大鼠肝臟細(xì)胞，經(jīng)PERCOLL密度梯度離心分離肝星狀細(xì)胞。臺(tái)酚藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞活力，a-SMA 蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定細(xì)胞純度。為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行打下了基礎(chǔ)。
　　 本文采用本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)熟練掌握的異源蛋白植入法，將異源蛋白植入1.5Kg新西蘭大白兔腹腔中，獲得原代成肌纖維細(xì)胞。并以高細(xì)胞密度種植在蓋破片

3、上，對(duì)其進(jìn)行機(jī)械損傷，研究損傷對(duì)成肌纖維細(xì)胞的形態(tài)和方向的影響。
　　 組織損傷歸根結(jié)底是細(xì)胞損傷，細(xì)胞的損傷造成2種病變現(xiàn)象：一是組織功能缺失，二是細(xì)胞死亡后形成的間隙會(huì)改變組織的空間構(gòu)象。細(xì)胞死亡形成間隙，從力學(xué)角度講即為細(xì)胞間預(yù)應(yīng)力的破壞。這會(huì)給細(xì)胞一個(gè)信號(hào)并使細(xì)胞做出響應(yīng)。
　　 本文從預(yù)應(yīng)力破壞角度出發(fā)，力求在體外培養(yǎng)條件下對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械損傷，使用生物力學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫組織化學(xué)、計(jì)算機(jī)圖像處理等多種研究方法

4、，觀察預(yù)應(yīng)力的破壞對(duì)細(xì)胞的形態(tài)和方向的影響。使用SPSS 等軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)中涉及到的細(xì)胞角度等進(jìn)行分析。
　　 主要結(jié)論如下:
　　 ①取成年雄性SD 大鼠，用鏈蛋白酶、膠原酶在體門(mén)靜脈灌注肝臟消化大鼠肝臟細(xì)胞，經(jīng)PERCOLL 密度梯度離心分離肝星狀細(xì)胞。臺(tái)酚藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞活力，a-SMA 蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定細(xì)胞純度。
　　 ②將異源蛋白植入1.5Kg 新西蘭大白兔腹腔中，獲得原代成肌纖維細(xì)胞。并以高細(xì)胞