基于FoxM1c抗癌先導(dǎo)藥物設(shè)計(jì)與研究.pdf

1、FoxM1c作為轉(zhuǎn)錄因子Fox家族成員之一，對(duì)正常細(xì)胞的增殖分裂具有重要的調(diào)控作用，但同時(shí)FoxM1的異常表達(dá)也能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的發(fā)生與發(fā)展。許多研究已經(jīng)證實(shí)，F(xiàn)oxM1在多種腫瘤細(xì)胞中持續(xù)高表達(dá)，而在正常靜止?fàn)顟B(tài)或高度分化的細(xì)胞中基本不表達(dá)。因此為通過(guò)靶向FoxM1蛋白來(lái)治療腫瘤提供了理論上的可行性，但是由于FoxM1轉(zhuǎn)錄因子的特性及其結(jié)構(gòu)上缺乏疏水性結(jié)構(gòu)，傳統(tǒng)小分子化學(xué)藥物很難靶向。因此傳統(tǒng)藥物學(xué)研究通常將轉(zhuǎn)錄因子排除在腫瘤治療靶蛋白

2、之外，但是隨著生物技術(shù)的發(fā)展，多肽藥物本身的優(yōu)點(diǎn)克服了傳統(tǒng)藥物固有的缺陷，從而使得靶向FoxM1成為可能性。另外天然植物藥中的許多成分具有抗腫瘤活性，因此使得其具有多靶點(diǎn)特性，這種特點(diǎn)與腫瘤多靶點(diǎn)治療思想和方法相吻合。
　　本研究首先在本實(shí)驗(yàn)室前期利用噬菌體隨機(jī)十二肽庫(kù)篩選獲得的高親和多肽序列的基礎(chǔ)上，通過(guò)MEME模體分析軟件獲得一條高親和多肽序列共有的模體序列:WHLD。之后再將模體序列與穿膜肽結(jié)合并最終確定兩條多肽序列CT-7

3、88.rrrrrrrrGSGSWHLD（r為D型精氨酸）和CT-789:WHLDGSGSWHLD。在合成之前，通過(guò)計(jì)算機(jī)分子對(duì)接軟件Molegro.Virtual.Docker(MVD)模擬兩條多肽與受體蛋白FoxM1c DNA結(jié)合區(qū)的相互作用。結(jié)果顯示兩條多肽分子均能與FoxM1cDNA結(jié)合區(qū)穩(wěn)定結(jié)合。
　　在分子對(duì)接的基礎(chǔ)上，我們合成了CT-788和CT-789兩種多肽，并進(jìn)行腫瘤細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)，用MTT法檢測(cè)多肽分子對(duì)腫瘤細(xì)胞

4、活力的影響，其中CT-788在濃度100μg/mL下對(duì)HEPG-2和MCF-7腫瘤細(xì)胞的抑制率分別為41.26％和34.26％，而相同濃度下CT-789對(duì)兩種細(xì)胞的抑制率分別為15.96％和17.8％。
　　通過(guò)顯微鏡直接觀察天然植物液處理過(guò)的腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)，可以清楚觀察到天然植物液YN-01能顯著抑制HEPG-2細(xì)胞的生長(zhǎng)，并且在4％的低濃度（含50％的乙醇）下就能殺死腫瘤細(xì)胞。MTT實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也很好地說(shuō)明了YN-01能夠很好抑制

5、HEPG-2細(xì)胞的活力，其4％的低濃度抑制率就高達(dá)68％。之后通過(guò)AO-EB細(xì)胞雙染、電泳檢測(cè)DNA ladder、Annexin V-FITC/PI標(biāo)記流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明了YN-01能夠引起HEPG-2細(xì)胞的凋亡。最后，熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示YN-01處理HEPG-224小時(shí)之后，F(xiàn)oxM1和p53的mRNA水平大幅上調(diào)，但48小時(shí)后其mRNA水平均大幅下調(diào)。抗凋亡基因Survivin和Bcl-2在48小時(shí)之后其mRNA水平