尿苷腺苷四磷酸鹽(Up4A)對人臍血晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、背景及目的：
　　心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)是一種由多因素參與的復(fù)雜病理過程，嚴(yán)重危害著人類的健康。血管內(nèi)皮損傷及其功能障礙是其發(fā)生和發(fā)展的重要基礎(chǔ)，而內(nèi)皮功能障礙的本質(zhì)是內(nèi)皮損傷和修復(fù)之間動態(tài)平衡的破壞。研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells, EPCs)能夠促進(jìn)受損血管的再內(nèi)皮化，參與血管內(nèi)皮損傷后的修復(fù)過程。EPCs是一類能增殖并分化為血管內(nèi)皮細(xì)

2、胞(endothelial cells，ECs)的前體細(xì)胞，根據(jù)EPCs在體外培養(yǎng)出現(xiàn)時(shí)間的先后和功能迥異特點(diǎn)分為早期 EPCs和晚期 EPCs。與早期 EPCs能分泌多種生長因子而體外成管及增殖能力較弱的特點(diǎn)相比，晚期EPCs增殖能力強(qiáng)，能直接參與血管生成，在內(nèi)皮修復(fù)過程中起重要作用。尿苷腺苷四磷酸鹽(uridine adenosine tetraphosphate，Up4A)在2005年首次被發(fā)現(xiàn)存在于人的血漿中，是一種在活體中首次

3、發(fā)現(xiàn)具有嘌呤和嘧啶結(jié)構(gòu)的、能夠引起血管收縮的二核苷酸。Up4A不僅能促進(jìn)人類平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，而且誘導(dǎo)活性氧和白細(xì)胞趨化因子的產(chǎn)生，參與炎癥反應(yīng)。在原發(fā)性青少年高血壓患者中，血漿中Up4A的水平明顯升高。因此，Up4A可能是CVD發(fā)生和發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素。目前國內(nèi)外尚無有關(guān)Up4A對晚期EPCs影響的研究報(bào)道。我們首先從人臍血中分離和培養(yǎng)出晚期EPCs，然后觀察Up4A對人臍血晚期EPCs功能的影響，并探討Up4A對晚期EPCs的

4、作用機(jī)制。
　　方法：
　　采用密度梯度離心法從人臍血獲取單個(gè)核細(xì)胞，將其接種在人纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h后，換液，1周內(nèi)每日換液，然后每隔1-2日換液一次，直至細(xì)胞傳代。并進(jìn)行鑒定。采用MTT比色法、Transwell小室、粘附能力測定實(shí)驗(yàn)檢測10-7、10-6、10-5mol/l Up4A及非選擇性P2受體拮抗劑suramin對晚期EPCs的增殖、遷移和粘附的影響。采用Western-blot檢測在10-7、

5、10-6、10-5mol/l Up4A和在6h、12h、24h、36h、48h下Up4A對晚期EPCs中SIRT1表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　從人臍血中分離的單個(gè)核細(xì)胞接種培養(yǎng)1-2周可出現(xiàn)克隆樣的ECs團(tuán)，并逐漸融合成鵝卵石樣的單層細(xì)胞，傳代后細(xì)胞形態(tài)保持不變。該細(xì)胞具有攝取DiI-acLDL和結(jié)合UEA-I并表達(dá)vWF能力。
　　隨著濃度的升高, Up4A抑制晚期EPCs的增殖、遷移、粘附。Up4A對晚期EPCs功能的

6、抑制作用呈一定的量效關(guān)系。Up4A對晚期EPCs功能抑制作用能部分地被非選擇性的P2受體拮抗劑suramin阻斷。隨著Up4A濃度升高和干預(yù)的時(shí)間增加，Up4A抑制SIRT1在晚期EPCs中的表達(dá)，但suramin能部分地拮抗晚期EPCs中Up4A對SIRT1的抑制作用。
　　結(jié)論：
　　1.從臍血中能夠分離和培養(yǎng)出晚期EPCs。
　　2. Up4A抑制晚期EPCs的增殖、遷移、粘附功能。
　　3. Up4A對晚