幽門螺桿菌相關(guān)胃癌基因差異表達(dá)譜的研究.pdf

1、我國(guó)胃癌的發(fā)生率在各類惡性腫瘤中位居第二，是嚴(yán)重危害人民身體健康的疾病。20世紀(jì)80年代以來，在人群中具有較高感染率的幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)與胃癌的關(guān)系已受到廣泛關(guān)注。流行病學(xué)證實(shí)，Hp慢性感染是導(dǎo)致胃癌的重要危險(xiǎn)因素之一，與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，感染人群患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)比非感染者高4倍。大多數(shù)研究表明在“慢性胃炎-胃黏膜萎縮-腸化生-異型增生-胃癌”這一癌變模式中，Hp可能起著先導(dǎo)作用。1998年Wa

2、tanabe等首次報(bào)道up感染的蒙古沙土鼠可發(fā)生胃癌，這是Hp感染可誘發(fā)胃癌的直接證據(jù)。1994年，世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)正式將Hp列為胃癌的Ⅰ類致癌原。但Hp引起胃癌的機(jī)制尚未完全闡明。
　　 胃癌的發(fā)生是一個(gè)多病因、多階段的過程，感染Hp后，其結(jié)局可能發(fā)生慢性胃炎，也可能發(fā)展為胃癌。提示不同的菌株可能對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生不同的影響，導(dǎo)致不同程度的疾病發(fā)生。
　　 本實(shí)驗(yàn)選用臨床分離自胃癌、胃炎患者的

3、菌株各10例分別和GES-1細(xì)胞以不同濃度比例共培養(yǎng)，12h、24h和48h后分別收獲細(xì)胞，進(jìn)行MTT和流式細(xì)胞儀檢測(cè)。結(jié)果顯示不同來源的Hp菌株對(duì)GES-1細(xì)胞在增殖方面的影響具顯著性差異，低濃度菌液可不同程度地促進(jìn)細(xì)胞增殖，高濃度菌液則抑制細(xì)胞增殖活性，并且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，低濃度菌液促細(xì)胞增殖作用逐漸增強(qiáng)，高濃度菌液對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用也越發(fā)明顯。不同疾病來源的Hp菌株均會(huì)引起胃黏膜上皮細(xì)胞凋亡率增加，但組間差異無(wú)顯著性。隨著時(shí)間的延

4、長(zhǎng)和細(xì)菌濃度的提高，Hp菌株促胃黏膜上皮細(xì)胞凋亡的影響越發(fā)顯著。
　　 分別挑選出對(duì)GES-1細(xì)胞的增殖影響最顯著和最小的兩株Hp菌株，分別和GES-1細(xì)胞共培養(yǎng)，收獲細(xì)胞后提取RNA產(chǎn)物與全基因組表達(dá)譜芯片雜交后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示Hp感染GES-1細(xì)胞后引起胃黏膜上皮細(xì)胞基因表達(dá)譜廣泛地改變，這些差異表達(dá)基因與原癌基因與抑癌基因的激活或失活、細(xì)胞周期、細(xì)胞骨架和運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞凋亡、DNA的合成、轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞信號(hào)、蛋白質(zhì)的翻譯、物

5、質(zhì)和能量代謝等過程有關(guān)。篩選出一些與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的基因，如TRAF1、HDAC6、ETS1、JUN、JUNB、CLDN1、CXCL2、IL-8、IRAK2、NUPR1、STC2、TP53BP1、TNFAIP3、DIO2以及SR蛋白家族，為下一步的基因表達(dá)驗(yàn)證和生物學(xué)功能研究提供了新的線索。
　　 在基因芯片的結(jié)果中挑選出差異性較大且科研意義較高、目前在Hp相關(guān)性胃癌發(fā)病機(jī)制尚未見報(bào)道的兩個(gè)基因：TRAF1和HDAC6。

6、將挑選出的對(duì)GES-1細(xì)胞的增殖影響最顯著和最小的兩株Hp菌株，分別和GES-1細(xì)胞共培養(yǎng)，用空白組進(jìn)行對(duì)照，共分為對(duì)照組、胃炎組和胃癌組，共培養(yǎng)24小時(shí)后。收獲細(xì)胞提取RNA產(chǎn)物，逆轉(zhuǎn)錄后得到cDNA，進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TRAF1和HDAC6在對(duì)照組、胃炎組、胃癌組中的表達(dá)依次增強(qiáng)，與基因芯片結(jié)果一致。
　　 利用取自于臨床的伴Hp感染的慢性淺表性胃炎、萎縮性胃炎(病檢示腸上皮化生、不典型增生)及胃癌患者的標(biāo)本進(jìn)行