RNA干擾沉默JARID1B基因治療套細(xì)胞淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究JARID1B蛋白、LSD1蛋白、組蛋白H3K9、H3K4甲基化在套細(xì)胞淋巴瘤中異常表達(dá)及其意義，尋找套細(xì)胞淋巴瘤分子治療的新標(biāo)靶；應(yīng)用小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)干擾套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株Jeko-1的JARID1B基因，了解干擾JARID1B對(duì)Jeko-1細(xì)胞增殖和凋亡的作用，以及對(duì)組蛋白甲基化、乙?；挠绊?，探討套細(xì)胞淋巴瘤基因治療的新方法。
　　方法：1、免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)

2、JARID1B蛋白、LSD1蛋白、組蛋白H3K9、H3K4甲基化在套細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)差異。2、設(shè)計(jì)JARID1B siRNA片段，經(jīng)LipofectamineTM2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染Jeko-1細(xì)胞后，RT-PCR檢測(cè)JARID1B mRNA轉(zhuǎn)錄水平的變化。3、應(yīng)用四唑鹽（MTT)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞調(diào)亡。4、Western blot檢測(cè)JARID1B siRNA作用后凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、procaspase-3、

3、C-my c表達(dá)水平的變化，以及JARID1B蛋白表達(dá)的變化、組蛋白H3K4甲基化及H3、H4乙?；癄顟B(tài)變化。
　　結(jié)果：1、與淋巴結(jié)反應(yīng)性增生比較，套細(xì)胞淋巴瘤JARID1B蛋白、LSD1蛋白表達(dá)增加、組蛋白H3 K4甲基化表達(dá)下降（p〈0.01)，有顯著性差異，而組蛋白H3K9表達(dá)變化不明顯。2、轉(zhuǎn)染后JARID1B的mRNA表達(dá)明顯減弱，且隨著濃度的提高，干擾效率也逐漸上升。3、JARID1B siRNA能明顯抑制Jeko-

4、1細(xì)胞的增殖，作用24小時(shí)的半數(shù)抑制濃度(IC50)約為60nM，JARID1B siRNA抑制Jeko-1細(xì)胞生長(zhǎng)周期，促進(jìn)凋亡，且隨著濃度增加及作用時(shí)間延長(zhǎng)，作用加強(qiáng)。4、轉(zhuǎn)染24小時(shí)后細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、procaspase-3及原癌基因C-my c的表達(dá)下降。5、JARID1B siRNA可引起Jeko-1細(xì)胞的JARID1B蛋白表達(dá)水平的降低，同時(shí)增加組蛋白H3K4甲基化及組蛋白H3的乙?；?，組蛋白H4的乙?；綗o顯

5、著變化。
　　結(jié)論：1、套細(xì)胞淋巴瘤中JARID1B蛋白、LSD1蛋白呈高表達(dá)，組蛋白H3K4呈低表達(dá)，而H3K9表達(dá)無明顯改變，提示JARID1B蛋白、LSD1蛋白、組蛋白H3K4可能與套細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生有關(guān)。2、運(yùn)用RNAi技術(shù)，可以有效地干擾Jeko-I細(xì)胞中JARID1B的表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。3、干擾JARID1B后可上調(diào)組蛋白甲基化H3K4，及組蛋白H3乙?；?。提示RNAi技術(shù)有望成為套細(xì)胞淋巴瘤靶向基因